Microdiseño de medios de cultivo para bacterias acido lácticas potencialmente probióticas destinadas a cerdos con proyección a escala industrial

FUSARI MARCIA LUCIA; SEQUEIRA GABRIEL JORGE; ZIMMERMANN JORGE ALBERTO; FRIZZO LAUREANO SEBASTIAN; ROSMINI MARCELO RAUL; ACOSTA FEDERICO; SIRINI NOELI; SOTO LORENA PAOLA

Esperanza

Jornada; VIII Jornada de Difusión de la Investigación y Extensión; 2020

Facultad de Ciencias Veterinarias - Universidad Nacional del Litoral

El enfoque tecnológico en la producción de un probiótico, supone establecer condiciones óptimas que permitan una buena producción de biomasa a gran escala. El medio utilizado para el crecimiento de bacterias acido lácticas (BAL) a escala de laboratorio es el Man, Rogosa and Sharpe (MRS), sin embargo, el alto costo que presenta, limita su utilización a nivel industrial y encarece el valor de productos probióticos destinados a cerdos, desalentando así su implementación en la industria porcina. En este contexto, el aprovechamiento de permeado de suero de queso (PSQ), suplementado de manera adecuada, ha cobrado importancia como sustrato para el crecimiento de BAL. No obstante, la generación de biomasa a bajo costo, supone optimizar la concentración de cada uno de los ingredientes que se utilicen teniendo en cuenta las interacciones que se producen entre ellos y evaluando cómo afectan el desarrollo de cada microorganismos1. Por lo tanto el objetivo de este trabajo fue determinar un mediode cultivo de PSQ que permita el desarrollo óptimo de la cepa potencialmente probiótica L. agilis DSPV009C a través del estudio de su crecimiento en distintas formulaciones de PSQ.El PSQ (lactosa 85% P/P; proteína bruta 3% P/P; cenizas (Na y Ca) 6% P/P; Arla Food Ingredients S. A. Porteña, Argentina) se utilizó con una concentración de 60 g/L y fue suplementado con sulfato de manganeso (MnSO4) (Anedra, San Fernando, Argentina), extracto de levadura (EL) (Oxoid, Basingstoke, UK), hidrolizado de suero de queso (HS) (obtenido por hidrólisis con Flavourzyme durante 4 h a 55°C y pH 6,0), peptona de caseína (P) (Sigma-Aldrich, San Luis, USA) y dextrosa (D) (Anhidra p.a. Biopack). Los ingredientes mencionados se utilizaron en distintos niveles dando origen al siguiente diseño factorial: 3 (EL 0 g/L, 4 g/L, 8 g/L) x 3 (HS 0 ml/L, 7 mL/L, 14 mL/L) x 2 (MnSO4 0 g/L, 0,003 g/L) x 2 (D 0 g/L, 20 g/L) x 2 (P 0 g/L, 10 g/L) =72 combinaciones posibles. La cepa L. agilis DSPV009C, había sido aislada de intestinos de cerdos sanos y seleccionada por demostrar propiedades probióticas in vitro. El crecimiento de la cepa se evaluó en microplacas estériles con 96 cavidades. Cada medio fue dispensado en un volumen total de 240 mL por cavidad y sembrado al 1 % con un cultivomadre de la cepa en MRS, crecido over night. Medio sin inocular fue utilizado como control negativo. Como control positivo, la cepa fue sembrada en caldo MRS, en las mismas condiciones. El crecimiento se midió por absorbancia a 630 nm de longitud de onda cada 30 min durante 24 horas a 37° C en el equipo Multi-Mode Microplate Reader, SynergyTM HT Biotek. Los parámetros de crecimiento analizados fueron el crecimiento máximo (Nmax), la velocidad máxima de crecimiento (Max V), el tiempo necesario para alcanzar la velocidad máxima de crecimiento (t- Max V), el tiempo de latencia o fase Lag (T Lag), el tiempo necesario para alcanzar el crecimiento máximo (t-Nmax). Las variables Nmax y Max V se estudiaron para determinar la combinación de ingredientes más eficiente para el crecimiento del microorganismo. Posteriormente todos los parámetros de crecimientos obtenidos en el medio seleccionado se compararon con el alcanzado en MRS. Los datos fueron analizados mediante unANOVA factorial univariante teniendo en cuenta el efecto individual de cada ingrediente y lasinteracciones sobre la variable dependiente. La prueba de Bonferroni se aplicó para evaluar lasinteracciones significativas. La comparación del crecimiento de la cepa en el medio seleccionado y con MRS se realizó mediante ANOVA de una vía. El análisis de los resultados mostró que los ingredientes EL, D y P (p