Desarrollo y validación de metodología analítica para identificar y cuantificar tulatromicina en diferentes matrices de bovino, por cromatografía líquida de alta performance en tandem con ionización por electrospray y detección por espectrometría de masas

ADDONA, S; ORTEGA, H.H.; BARCAROLO, D.; SALVETTI, N.R.; ANGELI, E.; HEIN, GUSTAVO J.

Esperanza

Jornada; VIII Jornada de difusión de la investigación y extensión.; 2020

Facultad de Cs Veterinarias, Universidad Nacional del Litoral

El objetivo de este trabajo fue desarrollar y validar una metodología analítica para identificar y cuantificar tulatromicina en diferentes tejidos de bovinos: hígado, riñón, músculo, sitio de inyección y grasa, por cromatografía liquida de alta performance en tandem con ionización por electrospray y detección por espectrometría de masas/masas (LC ESI MS/MS). La validación se define como el proceso de asegurar que un método analítico sea capaz de brindar resultados confiables con precisión y exactitud aceptables. Para validar una metodología analítica se utilizan las cifras de mérito con el propósito de calificar un determinado método y comparar sus propiedades analíticas con las provistas por otras técnicas [4]. Las cifras de mérito estudiadas fueron: Selectividad (Especificidad) / Linealidad y rango / Límite de Detección / Límite de Cuantificación / Precisión / Exactitud (Veracidad) / Robustez. Se utilizó un cromatógrafo líquido de ultra alta velocidad Shimadzu que consta de dos bombas binarias, un desgasificador y un muestreador automático SIL-20AC XR con horno para calentamiento de columna. La separación cromatográfica se realizó en una columna analítica Shimadzu Shim-pack GIST C18 (3,0 μm, 100 mm x 4,0 mm) provista de una columna de protección Shimadzu-pack GIST (G) C18 (3,0 μm, 4,0 x 10 mm) y termostatizada a 35 °C. La detección y cuantificación se lograron mediante el uso de un espectrómetro de masas triple cuadrupolo QTrap 3200 (AB Sciex) equipado con una fuente de iones por electrospray (ESI). La metodología analítica consistió en la homogeneización de la muestra con ácido clorhídrico nominal 2 mol/L y acetato de etilo, seguido del calentamiento de la fase acuosa resultante para hidrolizar la tulatromicina y sus metabolitos en el residuo marcador CP- 60,300. Luego se realizó una limpieza mediante extracción en fase solida (SPE) con un cartucho de intercambio catiónico, seguido de la evaporación del eluato bajo corriente de nitrógeno y posterior reconstitución en metanol/agua (1:1) para luego analizar mediante inyección directa por LC ESI MS / MS. Se utilizó un estándar interno perteneciente a la familia de la tulatromicina para normalizar las pérdidas durante el tratamiento de muestras.