Viabilidad de Lactobacillus salivarius DSPV010P encapsulada, destinadas a pollos parrilleros, durante el almacenamiento a diferentes temperaturas

BERISIVIL, A.P.; SIRINI, N. E.; ROSMINI, M.R.; SALUZZO, M.; SIGNORINI, M.L.; ZIMMERMANN, J.A.; ZBRUN, M.V.; SOTO L.P.

Esperanza

Jornada; VII Jornada de Difusión de la Investigación y Extensión; 2019

Facultad de Ciencias Veterinarias - Universidad Nacional del Litoral

El uso de los probióticos como herramienta profiláctica en sistemas de crianza intensivos de pollos parrilleros, está cobrando mayor relevancia en las últimas décadas. Éstos son microorganismos vivos que administrados en cantidades adecuadas confieren efectos benéficos en el huésped2 . Los probióticos deben sobrevivir a diversos factores como el proceso de producción, las condiciones de almacenamiento y las bio-barreras del hospedador hasta llegar al intestino del mismo. Para mejorar la tasa de supervivencia de los microorganismos probióticos frente a estos factores, la encapsulación se considera una metodología prometedora. El uso de polímeros como material de pared mejora la estabilidad física y mecánica dela cápsula probiótica1 . Por otro lado, la estabilidad de los probióticos encapsulados durante el proceso de secado mediante liofilización puede ser mejorada por la adición de crioprotectores. Algunos subproductos de la industria láctea, como el permeado de suero de queso, pueden utilizarse como crioprotectores y su implementación disminuiría el costo de producción del inóculo. Para que ejerzan su efecto probiótico, se recomienda que los alimentos que contienen bacterias probióticas tengan una concentración de 108?109 Log UFC/g justo antes de la ingestión para asegurar que en el tracto-intestinal se logre una concentración de 10 6 ?10 7 Log UFC/g4 de materia fecal. El objetivo de este trabajo fue evaluar la viabilidad de la cepa L. salivarius DSPV010P encapsulada, almacenada bajo diferentes condiciones de temperatura. La cepa L. salivarius DSPV010P de origen aviar, pertenece al cepario del LAA ICiVet/UNL-CONICET y fue seleccionada por su resistencia a las condiciones gastrointestinales, la hidrofobicidad de la superficie celular y la producción de compuestos antimicrobianos. Para llevar a cabo este objetivo, la cepa probiótica fue activada en placa en medio MRS (Man Rogosa and Sharpe), a 37ºC por 72 h en aerobiosis. Luego se realizaron dos cultivos consecutivos en caldo MRS a 37ºC durante 18 h. La biomasa de L. salivarius DSPV010P para su posterior encapsulación se obtuvo mediante un proceso de fermentación en bioreractor (Sartorius Stedim Biotech, Goettingen, Germany) con las siguientes condiciones controladas: agitación constante a 120 rpm, temperatura a 37ºC y pH=6. La cepa se inoculó al 2% en permeado de suero de queso (60g/l) (Arla Foods S.A.) suplementado con sulfato de manganeso 0,003g/l; extracto de levadura 4g/l, y se incubó a 37°C durante 18 h.. Al final de la producción de biomasa el cultivo fue enfriado y luego centrifugado a 4500 g durante 10 min a 17 ºC. Se descartó el sobrenadante y el pellet se lavó con buffer PBS dos veces. Posteriormente se procedió al armado de las cápsulas mezclando el cultivo, el material de pared (almidón pre-gelificado, concentrado al 20%) y los crioprotectores (la mitad de las cápsulas contenian leche descremada 6% y la otra mitad permeado de suero de queso 6%), en una proporción de 5:1 (biomasa:materiales/crioprotectores). La mezcla de los materiales y el armado de las cápsulas se realizó en un dispositivo creado para tal fin. Las cápsulas fueron congeladas a -80ºC por 18 h y luego liofilizadas durante 8h con una presión de 0.067 mbar y una temperatura de -54ºC (Martin Christ ALPHA 1-4 LD plus). Luego del proceso de liofilización, las cápsulas fueron almacenadas bajo diferentes condiciones de temperatura. Un tercio de las cápsulas fueron mantenidas a 4 ºC, otro tercio fueron conservadas a temperatura ambiente (TA) y el resto fueron conservadas a -20 ºC. Los recuentos del número de células viables se realizó al día 0 (post-liofilización) y cada 30 días durante un período de 180 días. Para ello se sembraron diluciones decimales en solución Ringer ¼ en placas con agar MRS. Las mismas fueron incubadas a 37 ºC durante 72 h en aerobiosis. Todas las determinaciones fueron realizadas por triplicado. La conservación de la viabilidad celular de las cápsulas fue evaluada mediante un diseño factorial: 1 (matriz) x 2 (crioprotectores) x 3 (temperatura) y se utilizó un ANOVA factorial de medidas repetidas y test de Duncan. En cuanto a los resultados, no se encontraron diferencias en la viabilidad celular de las cápsulas con el empleo de los crioprotectores (P=0,469). Cuando se analizó la interacción entre el efecto de los crioprotectores y la temperatura de almacenamiento sobre la viavilidad celular no se encontraron diferencias (P=0,255). Sin embargo, la temperatura de almacenamiento como factor principal afectó la conservación de la viabilidad celular a lo largo de los 180 días .