Inhibición de Campylobacter termotolerantes debido a sustancias proteinaceas producidas por bacterias ácido lácticas de origen porcino

FRIZZO, L.S; SIRINI, N.E; ZIMMERMANN, J.A.; BERISVIL, A.P; GJ SEQUEIRA; ROSMINI, M.R.

Congreso; II Congreso Internacional de Zoonosis IX Congreso Nacional de Zoonosis; 2018

Campylobacter coli y C. jejuni son importantes patógenos transmitidos por los alimentos. Debido a que pueden ser aislados de cerdos sanos y enfermos, es prioritaria la búsqueda de estrategias pre-matanza para disminuir la incidencia de estos patógenos en la cadena agroalimentaria. Las bacterias ácido lácticas (BAL) podrían ser una importante herramienta para ayudar a mejorar el equilibrio microbiano intestinal de los animales y disminuir la colonización por Campylobacter del intestino de los cerdos. Las BAL usan varios mecanismos para ejercer su efecto antimicrobiano, entre ellos, producción de ácidos orgánicos, peróxido de hidrógeno y proteínas de bajo peso molecular denominadas bacteriocinas. Las bacteriocinas tienen la particularidad de ser tóxicas para un espectro reducido de microorganismos y actúan sobre ellos, sin afectar la microbiota acompañante. En estudios previos se determinó que algunas cepas de Campylobacter eran inhibidas por el ácido producido por cepas BAL de origen porcino. El objetivo de este trabajo fue determinar si la inhibición de C. coli producida por BAL de origen porcino es producto de la presencia de sustancias proteicas. Las cepas de C. coli estudiadas fueron: C567 y C570 y las BAL fueron L. reuteri DSPV013C; L. agilis DSPV005C y L. salivarius DSPV014C. Todos los microorganismos pertenecen al cepario del Departamento de Salud Pública de la Facultad de Veterinaria UNL. Para evaluar el efecto inhibitorio, se utilizó la prueba de difusión en agar. Las cepas de C. coli se activaron mediante siembra en placa en mCCDA y fueron incubadas durante 48 h en condición de microaerofilia (H2:85%, CO2:10%, O2:5%). Luego se prepararon soluciones microbianas en Ringer-lactato, con una concentración de 107 UFC/ml de Campylobacter a partir de las placas de mCCDA (escala de Mc Farlan, patrón N° 0,5). Estas fueron sembradas en superficie mediante agotamiento en placas de Müller Hinton Agar. Se perforaron pocillos de 5 mm en el agar. Para la preparación de los extractos libre de células (ELC), las BAL se cultivaron en caldo MRS a 37 °C durante 24 h en aerobiosis. Se centrifugó el cultivo y el sobrenadante libre de células se neutralizó, ajustando el pH a 7,0 con NaOH 3N (ELCn). Luego se le agregó proteinasa K (1 mg/ml) y se calentó 60 minutos a 37°C para la desnaturalización de sustancias proteica presentes en el sobrenadante (ELCnK). Se sembraron 25µl de cada ELC en los pocillos de las placas con C. coli. Como control positivo se utilizó el ELCn. Las placas se incubaron durante 24 h a 42 °C. Luego se observó la presencia o ausencia de halos alrededor de cada pocillo. Ninguno de los ELC tratados con proteinasa k produjeron halos. Esto indicaría que la inhibición fue producida por sustancias proteicas, posiblemente bacteriocinas. Es necesario realizar más estudios para determinar si se trata realmente de bacteriocinas. Es de interés detectar cepas productoras de bacteriocinas anti-C.coli porque las mismas afectarían puntualmente el crecimiento de este agente zoonótico, sin perjudicar el crecimiento de otras poblaciones bacterianas. Estas BAL podrían ser potenciales herramientas para reducir la presencia de Campylobacter en las granjas.