Subproducto de la industria láctea como crioprotector de un inóculo probiótico para pollos parrilleros

ROSSLER, E.; ROSSI, L.; ASTESANA, D.M.; SIRINI, N.E.; BERISVIL, A.P.; BLAJMAN, J.E.; ZBRUN, M.V.

Casilda

Jornada; XVIII Jornadas de Divulgación Técnico Científicas 2017; 2017

Facultad de Ciencias Veterinarias - Universidad Nacional de Rosario

El uso de antibióticos en las dietas de pollos parrilleros como promotores de crecimiento provoca problemas como la resistencia de patógenos a los antibióticos, la acumulación de residuos de antibióticos en sus productos y en el medio ambiente, el desequilibrio de la microflora normal y la reducción de microflora intestinal beneficiosa. Una herramienta que puede prevenir estos problemas es el reemplazo de antibióticos por el uso de probióticos, los cuales confieren efectos benéficos al hospedador cuando se los administran viables y en concentraciones adecuadas (Nivel Mínimo Recomendado (NMR): 6 Log UFC). El mantenimiento de la viabilidad celular de los inóculos probióticos durante el almacenamiento se puede lograr utilizando diferentes metodologías de secado tales como la liofilización. Ésta permite obtener cultivos estables que ocupan pequeños volúmenes, reduciendo de esta manera los costos de almacenamiento y transporte. Sin embargo, la liofilización puede afectar significativamente la viabilidad celular. Diversos autores han demostrados que los carbohidratos y las sustancias proteicas ejercen un efecto protector sobre la supervivencia de las bacterias durante la liofilización y su posterior almacenamiento. Para aplicaciones en matrices lácteas como vehículo de probióticos, los ingredientes complejos, como la leche descremada, se usan comúnmente como crioprotectores. Sin embargo, se pueden usar crioprotectores alternativos, tales como disacáridos (por ejemplo, sacarosa, lactosa y trehalosa). El permeado de suero de queso (P) es un subproducto de la industria láctea, cuyo componente principal es la lactosa. La composición del P permitiría su implementación como crioprotector de cultivos microbiológicos, proporcionándole valor agregado y disminuyendo la contaminación ambiental como consecuencia de la generación de desperdicios de la industria láctea tratados incorrectamente. El objetivo del trabajo fue evaluar la utilización del P como agente crioprotector para el mantenimiento de la viabilidad de una cepa probiótica durante la liofilización y almacenamiento en diferentes temperaturas. La producción de biomasa de Lactobacillus salivarius 010 DSPV se realizó en un biorreactor tipo tanque agitado BIOSTAT A (Sartorius Stedim Biotech, Goettingen, Reino Unido) empleando el P (6% P/V) + extracto de levadura (0,8% P/V) + sulfato de manganeso (0,003 g/l) como medio de cultivo. La incubación se realizó durante 18 h con una temperatura de 37°C, un pH de 6 y una agitación constante de 120 rpm. Transcurrido el proceso de fermentación el cultivo se centrifugó a 4.500 g durante 10 min a 17ºC. Se descartó el sobrenadante y el pellet se lavó con buffer PBS dos veces. El pellet se dividió equitativamente en tres partes y se resuspendió en 10% del volumen inicial utilizando leche descremada estéril al 6 %, P al 6% y agua bidestilada utilizada como control negativo. La concentración bacteriana de las suspensiones se calculó mediante recuento en placa. Las suspensiones se congelaron a -80ºC por 18 h y luego se liofilizaron a 0,067 mbar durante 27 h. Finalizado el proceso de liofilización las muestras se almacenaron en diferentes temperaturas (temperatura ambiente a 25 ºC, refrigeración a 4ºC y congelación -20°C). Los recuentos del número de células viables se realizaron al día 0 (post-liofilización) y cada 15 días durante un período de 90 días. Para ello se sembraron diluciones decimales en solución Ringer ¼ en placas con agar MRS. Las mismas fueron incubadas a 37 ºC durante 72 h en aerobiosis. Este estudio fue realizado por duplicado. Los datos del efecto del proceso de liofilización se analizaron mediante el programa SPSS implementándose el test de t-student de muestras relacionadas, mientras que los datos de viabilidad a lo largo del tiempo se analizaron mediante el programa SPSS con un ANOVA de medidas repetidas y Test de Duncan. La viabilidad celular no se vio afectada por el proceso de liofilización (P=0,354), independientemente de los crioprotectores y del control estudiado. Sin embargo la viabilidad del liófilo presentó variaciones a traves del tiempo con la temperatura de conservación (P