Prevalencia de genes de virulencia en Campylobacter termotolerantes aislados de aves silvestres presentes en granjas de pollos parrilleros.

FUHR, E.M.; FUSARI, M.L.; LORENZON, G.; ASTESANA, D.M.; ZBRUN, M.V.; ROMERO SCHARPEN, A.; ZIMMERMANN, J.A.

Casilda

Jornada; XVIII JORNADAS DE DIVULGACIÓN TÉCNICO CIENTÍFICAS 2017 FCV; III JORNADAS DE DIVULGACIÓN TÉCNICO CIENTÍFICAS 2017 FCA; II REUNIÓN TRANSDISCIPLINARIA EN CIENCIAS AGROPECUARIAS; 2017

Facultad de Cs. Veterinarias Univeridad Nacional de Rosario

La campylobacteriosis es una infección provocada en los seres humanos por las especies termotolerantes del género bacteriano Campylobacter, principalmente C. jejuni y C. coli. Esta infección es una de las principales enfermedades gastrointestinales transmitidas por los alimentos (ETAs), representando desde el año 2005, la zoonosis más importante a nivel mundial1. Los pollos de engorde son el principal reservorio de esta bacteria y la carne derivada de estos animales para el consumo es la fuente más importante de infección en seres humanos2. Aunque se sabe de la presencia de estos microorganismos en la cadena agroalimentaria, se desconocen los mecanismos por los cuales Campylobacter ingresa, difunde y permanece en las granjas de engorde de pollos parrilleros. En este sentido, animales como roedores, pájaros, perros, gatos e insectos que circulan en los alrededores o ingresan a los galpones de crianza de pollos parrilleros pueden ser considerados vectores de Campylobacter. Existen estudios que demuestran que las aves silvestres, como los gorriones (Passer domesticus) juegan un papel importante en la epidemiología de Campylobacter2. Por otro lado, se sabe que para la infección del hospedador, Campylobacter utiliza diferentes mecanismos de supervivencia y virulencia, que incluyen la motilidad, la adhesión e invasión de la célula eucariota y la producción de toxinas. La adhesión e invasión de las células del huésped está dada por diferentes genes de virulencia, entre los cuales se destacan cadF3, ciaB3, iam4, racR3 y virB114. El estudio de la presencia de estos genes podría brindar información que permita explicar la presencia de determinadas cepas de Campylobacter en las granjas, así como la colonización del tracto gastrointestinal de los pollos.Debido a lo explicado anteriormente, el objetivo del presente trabajo fue evaluar la prevalencia de genes de virulencia (cadF, ciaB, iam, racR y virB11) en aislamientos de Campylobacter termotolerantes provenientes de aves silvestres presentes en diferentes granjas de pollos parrilleros. Esto contribuiría a generar información que permita determinar el papel de estas aves en la diseminación de Campylobacter en las granjas de pollos de engorde. En este estudio, se trabajó con una colección de aislamientos de Campylobacter termotolerantes, obtenidos en el año 2015 a partir de muestras de aves silvestres de tres granjas comerciales presentes en la zona de influencia de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad Nacional del Litoral. Los aislamientos fueron obtenidos a partir de materia fecal de: a-Passer domesticus (gorriones): 38 aislamientos, de los cuales 19 pertenecieron a la especie C. jejuni, 6 a C. coli y 13 pertenecieron al género Campylobacter sin poder identificar la especie correspondiente,b-Molothrus bonariensis (negrucho): 1 aislamiento, perteneciente al género Campylobacter; c-Pitangus sulphuratus (benteveo común): 1 aislamiento, perteneciente a la especie C. jejuni,Las cepas fueron conservadas a -80° C en un medio crioprotector y luego reactivadas en agar mCCDA, e incubadas a 42ºC en condiciones de microaerofilia (H2:85%, CO2:10%, O2:5%) durante 48 horas. Posteriormente, se verificó la pureza del cultivo y se corroboró la morfología típica de Campylobacter mediante microscopía de contraste de fases. Se realizó la extracción del ADN genómico a partir de una suspensión de cultivo fresco de cada cepa, mediante la utilización de un kit comercial (Wizard Promega®) y finalmente, se llevó a cabo una reacción de PCR, utilizando cebadores específicos para cada gen de virulencia a detectar 3,4.En los aislamientos provenientes de gorriones pudo determinarse la presencia de todos los genes estudiados en diferentes proporciones, siendo cadF el gen con mayor prevalencia (97,37%) y virB11 el de menor (7,89%). Los genes ciaB, iam y racR se encontraron en proporciones diversas siendo 34,21%, 44,74% y 23,68%, respectivamente. Además, se detectó que las cepas de la especie C. jejuni poseen todos los genes de virulencia evaluados en una proporción mayor al 40%, excepto en el caso de virB11. En esta especie, la prevalencia de los genes cadF, ciaB, iam, racR y virB11 fue de 100%, 57,89%, 42,10%, 47,37% y 10,53%, respectivamente. Por el contrario, las cepas de Campylobacter spp. presentaron ausencia de los genes ciaB, racR y virB11, y baja prevalencia del gen iam (23,08%). Por otro lado, las muestras de la especie C. coli presentaron alta prevalencia de los genes cadF (83,33%) e iam (100%), baja prevalencia de ciaB (33,33%) y virB11 (16,67%) y resultaron negativas para el gen racR. Por último, el aislamiento proveniente del negrucho resultó positivo únicamente para el gen cadF y la del benteveo común fue positiva para los genes cadF y racR. Teniendo en cuenta la gran prevalencia de los genes de virulencia relacionados a la colonización, adherencia e invasión del huésped encontrada en gorriones, particularmente en las cepas de C. jejuni, podríamos concluir que estas aves podrían actuar como vectores favoreciendo la introducción y permanencia de Campylobacter termotolerantes en las granjas de pollos. Si bien esta idea es discutible, especialmente por la dificultad con la que deberían encontrarse los animales para ingresar a los galpones cerrados donde se alojan los pollos, los galpones utilizados durante este estudio, no se encontraban completamente cerrados, por lo que las aves silvestres podían ingresar libremente en los mismos y tomar contacto con los pollos de engorde. En adición, en este trabajo se encontró que las cepas provenientes del benteveo común y del negrucho presentaron muy pocos genes relacionados a los factores de virulencia, principalmente los necesarios para lograr la invasión del huésped (ciaB, iam, racR y virB11). Sin embargo, sólo se obtuvo una única muestra de estas especies de aves, por lo que sería interesante estudiar más muestras provenientes de benteveos y negruchos presentes en las proximidades de las granjas de pollos.Como ya se expuso previamente, es necesario reducir la prevalencia de Campylobacter termotolerantes en pollos para evitar así la llegada de la bacteria al alimento y evitar de esta forma la campylobacteriosis humana. En este trabajo concluimos que el ingreso de gorriones en los galpones de pollos parrilleros, constituye una vía de transmisión, difusión y permanencia de la bacteria en los galpones de pollos de engorde. Es por esto que consideramos que una de las medidas a tomar en las granjas para reducir la contaminación de pollos, es evitar el contacto de estos animales con las aves silvestres presentes en los alrededores de las instalaciones. Para lograr lo anterior, es necesario que los galpones cuenten con medidas de bioseguridad acordes a la producción, principalmente es necesario evitar el ingreso de animales, mediante el uso de rejas o tejidos, para impedir el ingreso de vectores portadores de Campylobacter en la instalación.