Evaluación del Receptor de Insulina en bovinos con persistencia folicular ovárica.

RODRÍGUEZ FM; HUBER E; GAREIS NC; REY F; CATTANEO ML

Jornada; Jornada de difusión de la investigación y extensión. Universidad Nacional del Litoral.; 2017

La producción láctea ha aumentado en los últimos años en detrimento de la eficiencia reproductiva en el ganado bovino, causando grandes pérdidas económicas. Una importante causa de sub-fertilidad en vacas de alta producción es la enfermedad quística ovárica (COD). Esta enfermedad se caracteriza por el desarrollo de un folículo con diámetro superior al ovulatorio en ausencia de tejido luteal que persiste en el tiempo interrumpiendo el ciclo normal reproductivo1. La patogenia de esta enfermedad es compleja e involucra un trastorno plurifuncional del proceso de la ovulación. Entre los factores que intervienen, se ha demostrado que las concentraciones subluteales de progesterona inducen un aumento en la frecuencia de pulsos de LH, inhibiendo el pico preovulatorio de la misma y en consecuencia, la ovulación, provocando el crecimiento y persistencia de folículos dominantes. Por otro lado, existen evidencias que sugieren la existencia de componentes intraováricos en estadios tempranos de la persistencia folicular que podrían causar el desarrollo de quistes ováricos2. Aunque no se encuentra completamente definido el mecanismo por el cual se presenta la enfermedad, diversos factores metabólicos como la insulina se han propuesto como mediadores determinantes de las alteraciones descriptas.La insulina es un componente fundamental involucrado en el proceso de maduración folicular. Para mediar sus respuestas específicas debe unirse a su receptor en la membrana plasmática que desencadena una cascada de señalización intracelular. En folículos ováricos de bovinos, se detectó la expresión del receptor de insulina (IR) en células de la granulosa y células de la teca. Diversos estudios sugieren que alteraciones en la cascada de señalización de la insulina, participarían en disfunciones ováricas. En trabajos previos en nuestro laboratorio hemos detectado cambios en la expresión del IR en vacas con COD3. Es por ello que nos propusimos como hipótesis de trabajo que una alteración en los niveles de IR en estadios iniciales de la persistencia folicular afectaría la funcionalidad ovárica y en consecuencia, favorecería el desarrollo de la COD. Por lo tanto, nos proponemos como objetivo determinar la expresión del IR en folículos ováricos bovinos para conocer el momento crítico de la alteración de su expresión utilizando un modelo de persistencia folicular bovina que nos permite evaluar las primeras etapas de la formación de quistes. Para ello se utilizaron vacas de la raza Holando Argentino examinadas por tacto rectal y ultrasonografía antes del comienzo de la experiencia para comprobar la ausencia de alteraciones en su tracto reproductor; y la normalidad y regularidad de sus ciclos estrales. Los animales fueron sometidos a la sincronización de sus ciclos estrales mediante el protocolo adaptado G6G-Ovsynch4. Los animales del grupo control (C, n= 5) sólo recibieron el tratamiento G6G-Ovsynch. Los grupos experimentales con 0 (P0, n=5), 5 (P5, n=5), 10 (P10; n=5) y 15 días de persistencia (P15; n=5) además se trataron con dispositivos intravaginales de liberación lenta de progesterona (P4) hasta los 0, 5, 10 y 15 días de persistencia folicular respectivamente. La actividad ovárica fue verificada por ecografía (Transductor lineal transrectal 5 MHz, Honda HS101V, Japón) para evaluar la respuesta a los tratamientos. Los animales fueron sometidos a ovariectomía bilateral en el día esperado para la ovulación (P0) y a los 5 (P5), 10 (P10) y 15 (P15) días de persistencia folicular, y en el proestro de los animales del grupo control (C). Sobre las muestras de ovario se realizó la técnica de inmunohistoquímica indirecta para la determinación de la expresión de IR siguiendo el protocolo descripto previamente por Hein y col.3. La cuantificación del IR se realizó mediante análisis digital de imágenes (% de área marcada) con el programa informático IMAGE PRO PLUS. Se evaluaron las células de la granulosa y de la teca de folículos en crecimiento y en los diferentes estadios de persistencia folicular. Los datos obtenidos fueron evaluados mediante el programa estadístico SPSS 11.0.1 para Windows. Se realizó un análisis de la varianza de los datos obtenidos de la inmunomarcación de los distintos tipos foliculares aplicando pruebas paramétricas para varios grupos (ANOVA), y como análisis posterior se aplicó el post-test de Duncan. Los resultados mostraron expresión del IR en células de la granulosa y en células de la teca en todas las categorías foliculares analizadas. Se observó una mayor expresión del receptor en células de la granulosa de folículos terciarios respecto a folículos secundarios, tanto en el grupo control como en el grupo de persistencia de 5 días (p