LOCALIZACIÓN FOLICULAR DEL RECEPTOR DE LA HORMONA DEL CRECIMIENTO EN OVARIOS BOVINOS

MARELLI, BELKIS ESTER; SALVETTI, NATALIA RAQUEL; DURANTE, LEANDRO; ORTEGA, HUGO HÉCTOR; DIAZ, PABLO URIEL; LEIVA, CRISTIAN; MATILLER, VALENTINA; BELOTTI, EDUARDO MATIAS

Simposio; XII SIMPOSIO INTERNACIONAL DE REPRODUCCION ANIMAL; 2017

La hormona de crecimiento (GH), es producida en la adenohipófisis, estimula la liberación del factor de crecimiento análogo a insulina (IGF1) en el hígado y es clave para el control y distribución de los nutrientes. GH es el principal regulador postnatal del crecimiento y del metabolismo en los mamíferos, juega un rol crítico en el control de la lactación, en el proceso de desarrollo y crecimiento de la glándula mamaria y en la fertilidad en el bovino. En diferentes especies se ha demostrado que la GH puede estimular selectivamente los folículos ováricos, inhibiendo el crecimiento del folículo preovulatorio y estimulando el desarrollo de folículos subordinados. Los efectos somatotróficos y metabólicos de GH están mediados por el receptor de GH (GHR) localizado en la membrana celular. El ARNm que codifica para dicho receptor ha sido detectado en células de la granulosa, células de teca y células luteales del bovino. Sin embargo, actualmente no se dispone de información acerca de la expresión proteica y la localización de GHR en las diferentes categorías foliculares en el ovario bovino. Considerando lo anteriormente expuesto nos planteamos como objetivo del presente trabajo analizar la expresión proteica del GHR en las diferentes categorías foliculares (Braw-Tal & Yossefi 1997, J Reprod Fertil 109:165-71) de ovarios bovinos mediante la técnica de inmunohistoquímica (IHQ). Para ello se utilizaron ovarios de 8 vacas Holando Argentino con edad promedio de 6 años, cuyos ciclos estrales fueron sincronizados mediante el protocolo G6G. Las muestras fueron obtenidas mediante ovariectomía bilateral dos días después de finalizada la sincronización (proestro). Los ovarios fueron fijados en formol bufferado y procesados mediante técnicas histológicas de rutina hasta su inclusión en parafina (Ortega et al., 2009, Reproduction 137:865-77). Los cortes histológicos obtenidos fueron analizados mediante la técnica de IHQ indirecta utilizando un anticuerpo primario específico para GHR (Abcam ? ab202964, 1:100) y un anticuerpo secundario biotinilado Ant-Rabbit (San Cruz ? sc2040, 1:100). Las imágenes microscópicas de folículos de distintas categorías fueron digitalizadas y analizadas utilizando el sistema Image-Pro Plus 3.0.1, determinando el porcentaje (%) de área inmunopositiva tanto en la granulosa como en la teca. Los resultados fueron evaluados mediante el programa SPSS 10.1 utilizando el test de ANOVA, seguido del pos-test de Duncan para comparaciones múltiples. Mediante esta técnica fue posible detectar la expresión de GHR en células de la granulosa de todas las categorías foliculares analizadas: folículos primordiales, de transición, primarios, preantrales pequeños, preantrales grandes, antrales y atrésicos. También se evidenció inmunomarcación en células de la teca de los folículos preantrales grandes, antrales y atrésicos. En la granulosa se observó una disminución en la expresión proteica (menor % de área inmunomarcada) de GHR a medida que avanza el desarrollo folicular, siendo significativa en los folículos antrales (p0.05). Considerando las funciones de GH descriptas en diferentes especies (Hull & Harvey, 2000, Reproduction 5:175-182) y teniendo en cuenta la expresión evidenciada de su receptor en las distintas estructuras foliculares analizadas, podemos concluir que la disminución de GHR observada en folículos antrales podría asociarse indirectamente con la inhibición de su crecimiento debido a una menor respuesta a la GH en comparación con otros tipos foliculares.