Inhibición in-vitro de Campylobacter coli por bacterias acido lácticas de origen porcino

ROMERO SCHARPEN, A.; BLAJMAN, J.E.; SOTO, L.P.; ROMERO SCHARPEN, A.; BLAJMAN, J.E.; SOTO, L.P.; BERISVIL, A.P.; ASTESANA, D.M.; ZBRUN, M. V.; BERISVIL, A.P.; ASTESANA, D.M.; ZBRUN, M. V.; ZIMMERMANN, J.A.; FUSARI M.L.; ROSSLER, E.; ZIMMERMANN, J.A.; FUSARI M.L.; ROSSLER, E.

Esperanza

Jornada; IV Jornada de Difusión de la Investigación y la Extensión; 2016

Facultad de Ciencias Veterinarias UNL

La gastroenteritis es una de las principales enfermedades infecciosas que afecta a los cerdos jóvenes1 2. Para algunos autores, Campylobacter coli sería un agente primario y secundario de la diarrea del cerdo3. Sin embargo, este agente puede ser aislado de animales sanos y enfermos. Los microorganismos probióticos, incluyendo bacterias ácido lácticas (BAL) pueden ayudar a mejorar el equilibrio microbiano intestinal y, por tanto, disminuir la capacidad de Campylobacter para colonizar y crecer en el intestino de los cerdos. El objetivo de este trabajo, fue evaluar la actividad anti Campylobacter coli del extracto libre de células (ELC) de ocho cepas de BAL de origen porcino con actividad probiótica in vitro. La actividad de inhibición se evaluó mediante la prueba de difusión en agar. Ocho cepas de Lactobacillus (L. reuteri DSPV002C, DSPV004C y DSPV008C; L. agilisDSPV005C y DSPV009C; L. johnsonnii DSPV011C; L. fermentum DSPV012C; L. alivariusDSPV014C) se cultivaron en caldo De Man, Rogosa y Sharpe (MRS) a 37 ° C durante 24 h. Se centrifugaron los cultivos de BAL y los sobrenadantes se dividieron en ELC neutralizado (ELCn, con ajuste del sobrenadante libre de células a pH 7,0 con NaOH 3 N) y ELC sin neutralizar (ELCsn). Se utilizaron suspensiones de cuatro C. coli aisladas de cerdos con perfiles diferentes de PFGE (electroforesis en gel de campo pulsado). Se incubaron en agar nutritivo durante 48 h en un ambiente micro-aerofílico. La suspensión microbiana con una concentración de 107 UFC/ml de Campylobacter fue añadida a 15 ml de agar nutritivo (0,8% de agar) y luego sembrada en placas de Petri. Se perforaron pocillos de 5 mm en el agar, y se añadieron 35 µl de ELCsn y ELCn de cada cepa de LAB. Ácido láctico diluido a ¼ se utilizó como control positivo de formación de halo. Las placas se incubaron durante 48 h a 37 °C en condiciones de micro-aerófilia. Luego de la incubación, se midió el diámetro de la zona de inhibición alrededor de cada pocillo. En todos los casos se observó el efecto antagónico tanto del ELCsn y ELCn contra las 4 C. coli (tabla 1), lo que indica que la actividad probablemente no fue ejercida solamente por el bajo pH. Los principales inhibidores producidos por BAL, son los ácidos láctico y volátiles, peróxido de hidrógeno, y compuestos tipo-antibióticos como las bacteriocinas. Mientras que el ácido láctico es el principal producto catabólico, puede estaracompañado de otras sustancias inhibidoras como las nombradas anteriormente. En este estudio, la inhibición del crecimiento de Campylobacter causada por la presencia de ELCn, estaría mostrando que el efecto se podría deber a otros compuestos diferentes al ácido. L. salivarius DSPV014C mostró los mayores halos de inhibición frente a 2 de los cuatro C. coli (16 y 20 mm). L. reuteri DSPV004Cprodujo halos de inhibición en los ELCn, con halos entre 13-14 mm. en 3 de las 4 C. coli. En conclusión, L. reuteri DSPV002C, DSPV004C y L. salivarius DSPV014C mostraron las mejores capacidades de inhibición contra el crecimiento de C. coli. En futuros estudios se llevarán a cabo pruebas para determinar la naturaleza de las sustancias inhibidoras como peróxido de hidrógeno y/obacteriocinas producidas por BAL.