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Evaluación de la expresión de los receptores TGF-βRI y TGF-βRII a través del desarrollo folicular en bovinos lecheros. Matiller, V.1,2; Leiva, C.1; Barone, J.1; Stassi, A.1,2; Rey, F1,2; Salvetti, N.R.1,2; Ortega, H.H1,2.1 Laboratorio de Biología Celular y Molecular Aplicada, Instituto de Ciencias Veterinarias del Litoral (ICiVet-Litoral), Universidad Nacional del Litoral (UNL) / 2 Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Tecnológicas (CONICET), Esperanza, Santa Fe, Argentinavmatiller@fcv.unl.edu.arPICT 2015-1834: ?Influencia de la adrenocorticotrofina sobre la ovulación: expresión de componentes de la superfamilia del factor de crecimiento transformante Beta en el periodo preovulatorio en bovinos?.Los factores de crecimiento producidos localmente trabajan en conjunto con las gonadotrofinas a lo largo del continuo crecimiento de los folículos ováricos. Las estrechas interacciones entre señales extraováricas y factores intrafoliculares son las que determinan si el folículo continúa su desarrollo o diverge hacia las vías de la atresia (1). Los miembros de la superfamilia del Factor de crecimiento Transformante β (TGF-β) se expresan en los diferentes componentes del folículo ovárico, tanto en el ovocito como en las células somáticas que lo acompañan y cumplen funciones en múltiples aspectos del desarrollo folicular, incluyendo el reclutamiento de los folículos primordiales, la proliferación y apoptosis de las células de la granulosa, esteroidogénesis, expresión de receptores para gonadotrofinas, maduración del ovocito, ovulación, luteinización y formación del cuerpo lúteo (2). Estos ligandos realizan sus acciones a través de la unión a dos tipos de receptores de membrana (designados como tipo I y tipo II), formando complejos hetero-tetraméricos. La activación del receptor por fosforilación del dominio quinasa intracelular, conduce a la fosforilación de moléculas de señal corriente abajo denominadas SMADS, reguladas por receptor (R-SMADS). Dichas moléculas modulan la expresión génica a través de interacciones con diversos factores de transcripción, los coactivadores y correpresoresA través de estudios previos hemos podido observar la expresión de las isoformas TGF-B1, 2 y 3 en folículos bovinos en crecimiento (3), así como también de la proteína de unión TGF-βRIII. Ante la evidencia de la definida función de los ligandos como importantes moléculas de señalización paracrina y autocrina que regulan el crecimiento folículo ovárico, nos hemos propuesto desentrañar los mecanismos de señalización de los mismos y como objetivo nos hemos planteado examinar la expresión de los receptores TGF-βRI y TGF-βRII en el desarrollo de folículos ováricos de bovinos lecheros.En el desarrollo del presente trabajo se utilizaron hembras bovinas de la raza Holando Argentino, de establecimientos lecheros de la zona. Las mismas fueron inspeccionadas antes del comienzo de la experiencia a fin de confirmar la normalidad en su tracto reproductor y la regularidad de sus ciclos estrales. Los animales fueron sometidos al protocolo de sincronización del ciclo estral Ovsynch de la siguiente manera: se administraron 100 μg de un análogo sintético de GnRH (2,5 ml IM de acetato de buserelina, Receptal ®, Intervet, Argentina) el día -9, el día -2 se administraron 150 μg de prostanglandina (PG) (D+Cloprostenol, Ciclar, Zoovet®) y el día 0 se realizó la última administración de 100 μg de GnRH. La ovulación fue confirmada mediante ultrasonografía luego de la última inyección de GnRH y fue designada como día 1 del ciclo estral (figura 13). En proestro, los animales fueron sometidos a la ovariectomía y sobre las muestras obtenidas se realizó la técnica de inmunohistoquímica indirecta para la determinación de, TGF-βRI y TGF-βRII siguiendo el protocolo descripto previamente por Matiller y col. (3). La cuantificación se realizó mediante análisis digital de imágenes (% de área marcada). Se evaluaron las capas de la granulosa y de la teca interna en folículos en crecimiento (primarios, secundarios y terciarios). Se utilizó la técnica de Western Blot para la determinación de la especificidad de los anticuerpos utilizados. Los datos obtenidos fueron evaluados mediante el programa estadístico SPSS 11.0.1 para Windows. Se realizó un análisis de la varianza de los datos obtenidos de la inmunomarcación de los distintos tipos foliculares aplicando pruebas paramétricas para varios grupos (ANOVA), y como análisis posterior se aplicó el post-test de Duncan. Además se efectuó la comparación entre las células de la teca interna y de granulosa de las estructuras terciarias mediante el t Student. Los resultados mostraron expresión para TGF-βRI y TGF-βRII en el citoplasma de todas las categorías foliculares estudiadas, y tanto en las células de la granulosa como en las de la teca interna analizadas. Para el receptor TGF-βRI se hallaron diferencias significativas (p