Evaluación del crecimiento bacteriano in vitro de cepas de Staphylococcus aureus de origen bovino aisladas de infecciones intramamarias transitorias y persistentes.

LOVATO M; CALVHINO LF; SACCO SC; BARAVALLE C; DALLARD BE; PEREYRA EA; RENNA MS

Esperanza

Jornada; IV Jornadas de Difusión de la Investigación y la Extensión de la FCV.; 2016

Facultad de Ciencias Veterinarias-UNL

Staphylococcus aureus es uno de los patógenos más frecuentemente aislado de casos de mastitis bovina, tanto en Argentina, como en otros países de gran desarrollo lechero. Esta enfermedad ocasiona importantes pérdidas económicas en términos productivos, de salud animal y por requerimientos de servicios veterinarios; además tiene impacto en salud pública por la progresiva resistencia microbiana debido al uso excesivo de antibióticos. Aunque S. aureus puede causar mastitis aguda y clínica con alteración macroscópica de la leche, la forma más frecuente de presentación es la subclínica con tendencia a la cronicidad, sin alteración macroscópica de la leche, pero con recuentos elevados de células somáticas y persistencia de las bacterias en la glándula mamaria (GM). Se ha demostrado que estas diferencias en las formas de presentación dependen principalmente de variaciones entre cepas en términos de virulencia potencial3. De hecho, ciertas cepas de S. aureus son capaces de inducir de forma reproducible mastitis crónicas leves mientras que otras pueden causar mastitis gangrenosas en rumiantes1. Durante el cultivo in vitro del microorganismo, los factores de virulencia asociados a la superficie bacteriana se expresan preferentemente en la fase logarítmica de crecimiento, mientras que los factores de secreción son liberados en la fase post logarítmica. Se ha propuesto que esta expresión bifásica de los factores de virulencia cumpliría con la función de organizar el proceso de infección2.El objetivo de este estudio fue evaluar diferentes parámetros del crecimiento in vitro de cepas de Staphylococcus aureus de origen bovino y determinar asociaciones entre los mismos y la forma de presentación de la infección intramamaria (IIM) (transitoria-T o persistente-P).Se utilizaron 15 cepas de S. aureus aisladas de IIM bovinas: 9 cepas (179, 209, 864AI, 864PI, 806AI, 14AD, 14AI, 350AI y 3AI) provenían de IIM T y 2 cepas (5011 y 037AD) de IIM P. Las cepas aisladas solo una vez durante toda la lactancia fueron consideradas T y aquellas aisladas a partir de 3 muestreos consecutivos cada 21 días durante la lactancia fueron consideradas P. Además, se utilizaron 3 cepas (V329, 4125 y 843) portadoras del gen bap (que codifica para la proteína Bap asociada a la producción de biopelícula) y la cepa Neubould 305 (ATCC 29740). Las cepas conservadas a -80°C en crioviales conteniendo caldo Tripteína Soya ?TSC- suplementado con glicerol (15% v/v), se reactivaron mediante siembra en estrías en placas de Agar Base Columbia (Britania), y se incubaron por 24 horas en estufa a 35-37ºC. Luego se sembraron en medio líquido, en tubos de vidrio estéril se colocaron 5 ml de TSC a los cuales se les agregó una colonia aislada a partir del cultivo sólido. Las cepas se incubaron durante 16 horas en estufa a 37 °C, con agitación. A partir del cultivo líquido se realizaron diluciones (1:100) en placas de 96 pocillos. Se utilizó como control negativo TSC sin inocular. El crecimiento se determinó mediante lecturas de densidad óptica (DO) medida a 630nm; utilizando el equipo Multi-Mode Microplate Reader, SynergyTM HT Biotek durante 24 horas cada 1 hora. Los datos obtenidos fueron evaluados mediante el programa SPSS 11.0 para Windows (SPSS, Inc., Chicago, IL). La evaluación estadística de los datos de DO obtenidos de las curvas de crecimiento se realizó por ANOVA de medidas repetidas y post test de Duncan. El análisis de los tiempos de duración de la fase de crecimiento logarítmica (lagtime) obtenidos para cada cepa se realizó por ANOVA y post test de Tukey. Se consideraron significativas las diferencias de p