Evaluación del efecto inmunoprotector de Panax ginseng en glándula mamaria murina infectada con Staphylococcus aureus

BECCARIA C; ORTEGA HH; BARAVALLE C; RENNA MS; CALVINHO LF; SILVESTRINI P; PEREYRA E.A.; DALLARD BE,

Esperanza, Santa Fe

Otro; X Reunión Argentina de Patología Veterinaria y Décimo Seminario de la Fundación Charles Davis Foundation en Argentina.; 2016

Sociedad Argentina de Patología Veterinaria

El uso de compuestos modificadores de las respuestasinmunes frente a infecciones intramamarias (IIM) en bovinos, constituye unaalternativa a los tratamientos tradicionales con antibióticos. El ginseng es laraíz del Panax ginseng (PG) C.A.Meyer (Araliaceae), y ha sidoampliamente utilizado para el tratamiento y prevención de numerosasenfermedades en animales y humanos. Si bien estudiosprevios1 realizados por nuestro grupo de investigación han demostrado la capacidadinmunoestimulante del PG aplicado al momento del secado en glándulas mamarias (GM)bovinas no infectadas, elefecto inmunoprotector frente a una IIM no sido estudiado.Elobjetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto inmunoprotector del PG frentea una infección experimental por Staphylococcusaureus (S. aureus) en GM murinamediante el análisis del perfil de infección bacteriana y la cuantificación delnúmero de monocitos-macrófagos por IHQ. Para ello, se utilizaron dos grupos deratones cepa BALB/cJ en lactancia que fueron inoculados en forma intramamaria(IM) con 100 µl de extracto de PG (50mg/ml) (Grupo I) y con 100 µl de soluciónfisiológica (SF) (Grupo II). A las 72 hs post-inoculación (PI), ambos gruposfueron infectados con una dosis de 1x105 UFC/glándula de S. aureus. Paralelamente, un tercergrupo de ratones fue inoculado solamente con la misma dosis bacteriana (GrupoIII). A las 6, 24, 48, 72 y 96 hspost-infección (pi) se extrajeron las GM y se las dividió en 3 porciones pararealizar diferentes técnicas.Para determinar el perfil de infección generado y elclearance de la bacteria en la GM se cuantificó elnúmero de unidades formadoras de colonias (UFC) recuperadas/glándula adistintos tiempos pi por el método de dilución y siembra en placa de agar-base.Otras porciones de tejido se procesaron mediante técnicas histológicas derutina para la realización de IHQempleando un anticuerpo específico para monocitos-macrófagos (anti-CD14). Lascélulas CD14 positivas fueron identificadas debido a una marcacióncitoplasmática de color marrón dada por el cromógeno utilizado(diaminobencidina). Para la cuantificación de monocitos-macrófagos se digitalizaron campos microscópicos que cubrieron todael área a analizar en un aumento de 40x, tomándose entre 30 y 40 imágenes porcorte histológico y obteniéndose el número de células positivas por unidad deárea (mm2). La especificidad del anticuerpo primario utilizado enIHQ se corroboró mediante western bloten muestras de tejido mamario murino homogenizado.La evaluaciónestadística de los datos obtenidos se realizó por ANOVA factorial. Esteanálisis evalúa los efectos individuales del tratamiento (T) y del tiempo demuestreo (t) así como de la interacción entre ambos factores (Txt), utilizandoel programa SPSS. En cuanto a la evaluación del perfil de infección, el número de UFCrecuperadas de la GM fue menor en los ratones tratados con PG e infectados con S. aureus (Grupo I) en comparación conel número de UFC recuperadas de las GM de los Grupos II y III (p<0,001);observándose un efecto significativo en el tiempo de muestreo (p<0,001). Además, la interacción entre eltiempo de muestreo y el tratamiento fue significativa (p<0,001). El número de UFC recuperadas enlas GM murinas tratadas con PG e infectadas con S. aureus (Grupo I) fue menor a las UFC recuperadas en los GruposII y III a las 6 (p<0,001), 48 (p<0,01) y 96 hs(p<0,001) pi. Por otrolado, las células inmunopositivas para CD14 fueron observadas tanto en elestroma mamario como en el lumen de alvéolos y conductos de la GM murina entodos los grupos evaluados. La presencia de monocitos-macrófagos en la GM sevio influenciada por el tratamiento aplicado (p<0,001) y por el tiempo de muestreo (p<0,001); observándose además una interacción entre ambos factores(p<0,001). El número de monocitos-macrófagosfue mayor en las GM del Grupo I respecto al númeroobservado en las GM de los Grupos II y III a las 6 (p<0,001), 24 (p<0,001) y 48 hs (p<0.001) pi. Considerandoestos resultados en conjunto, podemos concluir que la mayor capacidad decontrolar la infección bacteriana (determinada por el menor número de UFCrecuperadas de la GM) así como el incremento en el número de monocitos-macrófagosdetectados en las GM de ratones tratados con PG, indicarían un efecto inmunoprotectorpor parte del extracto frente a una IIM experimental con S. aureus. Futuros estudios con el extracto utilizado en bovinos enproducción, permitirán generar conocimientos para el desarrollo de nuevos compuestosinmunoprotectores que puedan utilizarse para el control de las IIM.1 BaravalleC. y col. 2015. Intramammary infusion ofPanax ginseng extract in bovine mammary gland at cessation of milking induceschanges in the expression of toll-like receptors, MyD88 and NF-kB during earlyinvolution. Research in Veterinary Science. 100: 52?60.