ICIVET-LITORAL   24728
INSTITUTO DE CIENCIAS VETERINARIAS DEL LITORAL
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Evaluación del efecto de diferentes concentraciones de un extracto de Panax ginseng sobre el crecimiento bacteriano, la viabilidad celular in vitro y la concentración inhibitoria mínima de la cefalexina.
Autor/es:
BECCARIA C; RENNA MS; SACCO SC; ANDREOTTI CS; PEREYRA EAL; CALVINHO LF; BARAVALLE C; DALLARD BE
Lugar:
La Plata
Reunión:
Otro; XV Reunión anual de grupos de investigación en mastitis bovina.; 2015
Institución organizadora:
Laboratorio de Estudios Farmacológicos y Toxicológicos (LEF y T). Universidad Nacional de La Plata.
Resumen:
La glándula mamaria (GM) bovina es altamente susceptible a las nuevas infecciones intramamarias (IIM) durante la etapa temprana del período de vaca seca y el parto, cuando las defensas están deprimidas. Las IIM que se originan en el período seco pueden reducir la producción láctea hasta en un 35% y están asociadas con mastitis clínicas durante el primer mes de lactancia. El uso de antibióticos intramamarios administrados al inicio del período seco controla parcialmente las IIM presentes al secado y disminuye las IIM al parto. Sin embargo, la necesidad de lograr mayores tasas de curación de IIM en el secado temprano y prevenir IIM ha motivado la búsqueda de nuevas alternativas dirigidas a reforzar tanto la terapia antimicrobiana administrada al secado, como los factores protectores naturales de la GM. Una de ellas, es la utilización de modificadores de la respuesta biológica (MRB) o inmunomoduladores capaces de interactuar con el sistema inmune y modular la respuesta del huésped, resultando en un incremento o una depresión de la respuesta inmunitaria.En los últimos años, nuestro grupo de trabajo ha centrado sus investigaciones en el estudio de la inmunomodulación de la GM bovina a través de la utilización de MRB aplicados al inicio del período de vaca seca, generando conocimientos acerca del efecto en la GM bovina de compuestos con potencial inmunoestimulante. Uno de los MRB evaluados es el extracto de la raíz de Panax ginseng (PG). Los principales resultados obtenidos muestran que la aplicación intramamaria de un extracto de PG al momento del secado incrementa la respuesta inmune innata en la GM y contribuye a acelerar el proceso de remodelación durante la involución activa.El objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto de diferentes concentraciones de un extracto de PG sobre el crecimiento bacteriano, la viabilidad celular in vitro y la concentración inhibitoria mínima de la cefalexina.En una primera instancia, con el fin de evaluar el efecto de diferentes concentraciones de PG sobre el crecimiento de tres cepas de Staphylococcus aureus se realizaron ensayos de microdilución en caldo en placas de microtitulación de 96 pocillos con mediciones de densidad óptica (DO) durante 24 hs. De acuerdo a un patrón de distribución en 3 grupos (uno por cada cepa) se colocaron en los pocillos diferentes dosis de PG (0,1-0,5-1-3 mg/ml) diluidas en caldo Mueller-Hinton (M-H) y se inocularon con la cepa Newbould y con las cepas de campo (17 y 5128) aisladas a partir de IIM bovinas; a su vez, se dejaron pocillos sin PG como control. Las lecturas de DO se realizaron en el equipo Multi-Mode Microplate Reader, SynergyTM HT Biotek cada 30 min durante 24 hs. Los análisis estadísticos se llevaron a cabo realizando ANOVA factorial de medidas repetidas y post test de Duncan. Posteriormente, para determinar el efecto de diferentes concentraciones de PG sobre la viabilidad celular, se llevaron a cabo ensayos in vitro donde monocapas de células epiteliales mamarias bovinas (MAC-T) fueron expuestas a diferentes concentraciones de PG (3, 5, 10 mg/ml) durante 3, 6, 24 y 48 hs. Por último, se evaluó mediante ensayos de microdilución en placa el efecto del PG sobre la concentración inhibitoria mínima de la cefalexina, utilizando una cepa de referencia de S. aureus (ATCC 29213). El método de microdilución se realizó en placas de 96 pocillos (12x8) con fondo en U. En las dos primeras filas A y B se realizaron 11 diluciones seriadas en base 2 del antimicrobiano (cefalexina) en caldo M-H y un pocillo control (columna 12) de caldo sin antimicrobiano. Con este esquema de diluciones en la columna 1 se ubicó la concentración más alta del antimicrobiano (64 µg/ml) y en la columna 11 la más baja (0,0625 µg/ml). En las filas C y D se adicionó al caldo PG en una concentración final de 0,5 mg/ml. Por otra parte, en las filas E y F, se adicionó PG en una concentración de 3 mg/ml. El volumen final de cada pocillo fue de 100 µl. La preparación del inóculo se llevó a cabo a partir de una suspensión de 108 UFC/ml (0,5 de la escala de Mc Farland) que posteriormente se diluyó 1:10, con lo que se obtuvo una concentración final de 5x105 UFC/ml o 5x104 UFC/pocillo. Se sembraron en cada pocillo de la placa 5 µl del inóculo. Además de los pocillos de control de crecimiento (pocillos sin antibiótico), se prepararon controles negativos (caldo sin inocular). La placa se incubó a 37º C durante 24 hs. Tras la incubación se procedió a la lectura de los resultados visualmente y mediante determinación de densidades ópticas por espectrofotometría en una longitud de onda de 600 nm. Se determinó como CIM a la menor concentración del antimicrobiano en la cual no se observó crecimiento bacteriano a simple vista, tomando como referencia el crecimiento observado en los pocillos control de crecimiento positivo, los cuales presentaban un botón mayor a 2 mm de diámetro. La CIM de las cefalosporinas, que incluye a la cefalexina, recomendada por National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) está comprendida entre 0,12 µg/ml a 0,5 µg/ml.El análisis de las DO obtenidas luego de la incubación de las cepas de S. aureus con diferentes concentraciones de PG durante 24 hs demostró que la concentración de 3 mg/ml PG aumentó en forma significativa el crecimiento de las tres cepas evaluadas (p