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La glándula mamaria (GM) bovina esaltamente susceptible a las nuevas infecciones intramamarias (IIM) durante laetapa temprana del período de vaca seca y el parto, cuando las defensas estándeprimidas. Las IIM que se originan en el período seco pueden reducir la producciónláctea hasta en un 35% y están asociadas con mastitis clínicas durante elprimer mes de lactancia. El uso de antibióticos intramamarios administrados alinicio del período seco controla parcialmente las IIM presentes al secado y disminuyelas IIM al parto. Sin embargo, la necesidad de lograr mayores tasas de curaciónde IIM en el secado temprano y prevenir IIM ha motivado la búsqueda de nuevasalternativas dirigidas a reforzar tanto la terapia antimicrobiana administradaal secado, como los factores protectores naturales de la GM. Una de ellas, esla utilización de modificadores de la respuesta biológica (MRB) o inmunomoduladores capaces de interactuar conel sistema inmune y modular la respuesta del huésped, resultando en un incremento o una depresión de la respuestainmunitaria.En los últimos años, nuestro grupo detrabajo ha centrado sus investigaciones en el estudio de la inmunomodulación dela GM bovina a través de la utilización de MRB aplicados al inicio del períodode vaca seca, generando conocimientos acerca del efecto en la GM bovina de compuestoscon potencial inmunoestimulante. Uno de los MRB evaluados es el extracto de laraíz de Panax ginseng (PG). Los principales resultadosobtenidos muestran que la aplicación intramamaria de un extracto de PG almomento del secado incrementa la respuesta inmune innata en la GM y contribuyea acelerar el proceso de remodelación durante la involución activa.La cuantificación de laactividad in vitro de losantimicrobianos se evalúa habitualmente mediante alguna de las variantes de losmétodos de dilución. Estos métodos se basan en la determinación del crecimientodel microorganismo en presencia de concentraciones crecientes delantimicrobiano, que se encuentra diluido en el medio de cultivo. La concentracióninhibitoria mínima (CIM) se define como la menor concentración de antimicrobianoque a simple vista inhibe completamente el crecimiento del microorganismoestudiado.El objetivo del presentetrabajo fue evaluar mediante ensayos de microdilución en placa el efecto del PGsobre la concentración inhibitoria mínima de las cefalosporinas (cefalexina),utilizando una cepa de referencia de Staphilococcusaureus (ATCC 29213). El método de microdilución se realizó en placas de 96 pocillos(12x8) con fondo en U. En las dos primeras filas A y B se realizaron 11diluciones seriadas en base 2 del antimicrobiano (cefalexina) en caldo Mueller-Hinton(M-H) y un pocillo control (columna 12) de caldo sin antimicrobiano. Con esteesquema de diluciones en la columna 1 se ubicó la concentración más alta del antimicrobiano(64 µg/ml) y en la columna 11 la más baja (0,0625 µg/ml). En las filas C y D seadicionó al caldo PG en una concentración final de 0,5 mg/ml. Por otra parte, enlas filas E y F, se adicionó PG en una concentración de 3 mg/ml. El volumen finalde cada pocillo fue de 100 µl. La preparación del inóculo se llevó a cabo a partir de unasuspensión de 108 UFC/ml (0,5de la escala de Mc Farland) que posteriormente se diluyó 1:10, con lo que seobtuvo una concentración final de 5 x 105 UFC/ml o 5 x 104UFC/pocillo1. Se sembraron en cada pocillo de la placa 5 µl delinóculo. Además de los pocillos de control decrecimiento (pocillos sin antibiótico), se prepararon controles negativos(caldo sin inocular). La placa se incubó a 37º C durante 24 hs. Serealizaron recuentos de colonias para verificar que la concentración delinóculo final obtenido fue de 5 x 105UFC/ml. Para ello se tomó una alícuota de 10 µl de cada pocillo control y serealizaron diluciones seriadas que se sembraron por duplicado (20 µl) en placasde agar base. Tras la incubación se procedió a la lectura de los resultados visualmentey mediante determinación de densidades ópticas por espectrofotometría2en una longitud de onda de 600 nm.Sedeterminó como CIM a la menor concentración del antimicrobiano en la cual no seobservó crecimiento bacteriano a simple vista, tomando como referencia elcrecimiento observado en los pocillos control de crecimiento positivo, loscuales presentaban un botón mayor a 2 mm de diámetro. La CIM de las cefalosporinas, queincluye a la cefalexina, recomendada por National Committee for ClinicalLaboratory Standards (NCCLS) está comprendida entre 0,12 µg/ml a 0,5 µg/ml.Alcomparar el crecimiento de Staphylococcusaureus en las diferentes concentraciones de cefalexina se determinó que tantoen el caldo sin PG como en el caldo con PG en una concentración de 0,5 mg/mllos botones indicadores de crecimiento se visualizaron hasta la dosis 0,25 µg/mlinclusive, determinando como CIM la dosis inmediata superior de 0,5 µg/ml. Encambio en el caldo con PG en una concentración de 3 mg/ml, los botonesindicadores de crecimiento se visualizaron hasta la dosis de 0,125 µg/mlinclusive, determinando como CIM la dosis inmediata superior de 0,25 µg/ml.Las densidadesópticas (DO) obtenidas de las lecturas en espectrofotómetro coincidieron conlas lecturas visuales, aquellos pocillos con densidades ópticas mayores a 1 sonlos mismos que mostraron botón de crecimiento a simple vista (Tabla 1). 1µg/ml 0,5 µg/ml 0,25 µg/ml 0,125 µg/ml 0,0625 µg/ml control Caldo sin PG 0,440 0,479 1,027 1,582 1,951 2,162 Caldo + PG (0,5 mg/ml) 0,313 0,510 1,047 2,052 2,158 2,308 Caldo + PG (3 mg/ml) 0,488 0,840 0,727 1,214 1,609 2,427 Tabla1: Promedio de los valores OD de los diferentes tratamientos y dosis, medidospor espectrofotometría. En conclusión, el agregado de 3 mg/ml dePG al caldo M-H disminuyó la CIM de la cefalexina, lo que podría tener relevancia al momento deelaborar formulaciones de aplicación intramamaria que contengan PG yantibióticos como alternativa a la terapia de secado tradicional. Se necesitanfuturos estudios que determinen qué tipo de interacciones son las que seestablecen entre la cefalexina y el PG. 1- GarcíaRodríguez J.A.; Cantón R.; García Sánchez J.E.; Gómez Lus M.L.; Martínez L.;Rodríguez- Avial C.; Vila J. (2000) Procedimientos en Microbiología Clínica. Métodosbásicos para el estudio de la sensibilidad a los antimicrobianos. SociedadEspañola de Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica. http://www.seimc.org/documentoscientificos.php?mn_MP=3&mn_MS=3572- Stiefel S.; Gumiy D.; Canalis M.; Siroski, P.; Picco, E;Ortega, H; Formentini, E. (2013) Desarrollo de un método colorimétrico enmicroplaca para determinar la cinética de crecimiento de Staphylococcus aureus. Revista FAVE - Ciencias Veterinarias ISSN 1666-938X.vol. 12 (pág. 1-2).