Análisis de la microbiota del ciego de pollos parrilleros suplementados con probióticos por DGGE.

BLAJMAN, J.E.; BERISVIL, A.P.; CONTI, G.B.; ASTESANA, D.M.; ROMERO SCHARPEN, A.; ROSSLER, E.; SOTO, L.P.; MARTÍ, L.E.; FRIZZO, L.S.

Santa Fe

Jornada; XVI Jornadas Argentinas de Microbiología y III Congreso Bioquímico del Litoral.; 2015

Asociación Argentina de Microbiología

La electroforesis en gel con gradiente desnaturalizante (DGGE) es una técnica molecular utilizada para estudiar la microbiota dominante cultivable y no cultivable en comunidades microbianas complejas. El objetivo de este ensayo fue analizar la dinámica poblacional a través del tiempo de la microbiota del ciego de pollos parrilleros tratados con la cepa potencialmente probiótica Lactobacillus salivarius DSPV 001P mediante DGGE. Se emplearon 96 pollos parrilleros de 1 d de vida, divididos en tres réplicas de 32 pollos (un grupo experimental). La cepa fue suministrada con la dieta en una dosis de 1x1010 UFC/pollo durante 9 d y 1x109 UFC/pollo durante los 7 d restantes. Al día 1, 15, 30 y 45 de la crianza, seis pollos tomados al azar (dos por réplica) fueron sacrificados por dislocación cervical. Una fracción de 0,2 g de ciego de cada pollo fue utilizada para la extracción de ADN y amplificación por PCR empleando los primers universales GC-HDA1 y HDA2 que amplifican la región V2-V3 del gen del ARNr 16S. Los productos de PCR se sembraron en geles de poliacrilamida 8 % p/v en tampón TAE con gradiente desnaturalizante urea-formamida 40-55%. En cada extremo de los geles se sembró un patrón constituido por los productos de PCR de las siguientes cepas: Enterococcus faecium DSPV 22T, L. salivarius DSPV 001P, Campylobacter jejuni C173 y Salmonella enteritidis 421. La electroforesis se llevó a cabo a voltaje constante 130 V durante 4 h a 60 °C. Los geles se tiñeron con SYBR® Safe y se visualizaron en un transiluminador. Los perfiles DGGE arrojaron patrones compuestos por 5 a 16 bandas dependiendo de la muestra analizada. Un total de 35 bandas fueron escindidas y enviadas a secuenciar, comparándose con las secuencias de ADNr 16S disponibles en el GenBank para su identificación. Ocho bandas presentaron altos porcentajes de identidad con secuencias de bacterias no cultivables, 10 con secuencias de bacterias cultivables y 18 compartieron igual porcentaje de identidad con bacterias cultivables y no cultivables. Bacterias pertenecientes a los géneros Clostridium, Enterococcus, Lactobacillus y Escherichia fueron identificadas. Además, algunas bandas tuvieron altos porcentajes de identidad con especies de los géneros Shigella, Hespellia, Robinsonella, Blautia, Ruminococcus, Streptococcus y Alistipes. Fue posible encontrar bandas en la misma posición que la cepa de referencia L. salivarius DSPV 001P en muestras de pollos parrilleros de todas las edades. Sin embargo, la secuenciación de dichas bandas coincidió con L. salivarius sólo en muestras de pollos parrilleros de 45 días de edad. En conclusión, este trabajo permitió definir a través del tiempo la microbiota dominante del ciego de pollos parrilleros que habían recibido la cepa potencialmente probiótica L. salivarius DSPV 001P. Como consecuencia de las limitaciones de esta técnica, DGGE no puede ser utilizada como única herramienta de rastreo de bacterias probióticas. Los datos obtenidos en este ensayo podrían ser importantes para futuros estudios relacionados con la manipulación de la microbiota del tracto gastrointestinal, a fin de mejorar los parámetros productivos y el estado sanitario de los pollos parrilleros.