La infección crónica por Staphylococcus aureus induce cambios en el balance proliferación-apoptosis en la glándula mamaria bovina durante la involución activa.

ANDREOTTI C. S.; PEREYRA, E.A.L.; SACCO, S; BARAVALLE, C.; ORTEGA, H.H.; CALVINHO, L.F.; DALLARD BE.

Esperanza

Jornada; II Jornadas de Difusión de la Investigación y Extensión de la Facultad de Ciencias Veterinarias; 2014

Facultad de Ciencias Veterinarias (Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires), Tandil, Buenos Aires

Durante el periodo de involución, en la glándula mamaria (GM) bovina, se produce un importante proceso de remodelación que implica regresión (apoptosis), proliferación y diferenciación de las células mamarias a los fines de prepararse para la lactancia siguiente 1. Durante la involución temprana aumenta el riesgo de infecciones intramamarias (IIM) relacionadas con cambios morfológicos que facilitan la penetración bacteriana por el canal del pezón, al interferir con los mecanismos de defensa naturales y favorecer el crecimiento bacteriano 3. La mastitis bovina, es reconocida mundialmente como la enfermedad que más pérdidas ocasiona en el ganado lechero, generando graves daños al tejido mamario. Dicho daño puede estar inducido por dos mecanismos principales de muerte celular: necrosis o apoptosis, diferenciadas por los cambios morfológicos, bioquímicos y moleculares que se producen en las células destinadas a morir 2. Staphylococcus aureus es un patógeno mayor de la GM que causa principalmente mastitis subclínicas y crónicas que responden pobremente a la terapia antibiótica 4. El objetivo de este trabajo fue evaluar los procesos de proliferación y apoptosis durante la involución de la GM bovina, en cuartos sanos en relación a infectados crónicos por S. aureus, cuantificando la expresión de PCNA (antígeno nuclear de proliferación celular), de la proteína antiapoptótica Bcl2, de la proteína proapoptótica Bax y del receptor Fas por inmunohistoquímica (IHQ); e identificando apoptosis in situ por TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labelling). Se utilizaron vacas Holstein no preñadas, en la etapa final de la lactancia. Se obtuvieron muestras de tejido mamario a los 7, 14 y 21 días luego del último ordeño. Cuartos sanos (n=8) e infectados crónicos por S. aureus (n=8) fueron incluidos en cada grupo (7, 14 y 21 días). Los tejidos fueron incluidos en parafina. Se realizó IHQ utilizando anticuerpos primarios específicos y el sistema de revelado estreptavidina-peroxidasa-DAB, tanto para evaluar la proliferación (anti-PCNA) como para analizar las proteínas reguladoras de la apoptosis (anti-Bcl2, Bax y el receptor Fas). Por otro lado, para evaluar el porcentaje de células en apoptosis se utilizó la técnica TUNEL mediante el kit Apop Tag® Plus?Peroxidasa (Chemicon) que permitió la marcación enzimática de la ruptura de las cadenas de ADN y la detección de apoptosis in situ. Para la cuantificación de la expresión proteica, y para la obtención de los porcentajes de proliferación y apoptosis se empleó el programa Image-Pro Plus 3.0.1 (Media Cybernetic). El análisis estadístico de los datos se realizó mediante ANOVA factorial que evalúa los efectos de la IIM, del tiempo y la interacción. Para evaluar diferencias en cada tiempo de muestreo entre cuartos sanos e infectados se realizó t-student. En el parénquima mamario el análisis de los porcentajes de proliferación, evaluados a través de la expresión nuclear de PCNA, reveló un efecto significativo de la IIM y del tiempo de muestreo (p