Balance proliferación/apoptosis en glándula mamaria bovina infectada por Staphylococcus aureus durante la involución.

ANDREOTTI CS; PEREYRA EAL; SACCO SC; BARAVALLE C; RENNA MS; ORTEGA HH; CALVINHO LF; DALLARD BE

Tandil

Otro; IX Reunión Argentina de Patología Veterinaria (RAPAVE) 2014.; 2014

Facultad de Ciencias Veterinarias. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires

Durante el periodo de involución, en la glándula mamaria (GM) bovina, se produce un importante proceso de remodelación que implica regresión (apoptosis), proliferación y diferenciación de las células mamarias a los fines de prepararse para la lactancia siguiente. Durante la involución temprana aumenta el riesgo de infecciones intramamarias (IIM) relacionadas con cambios morfológicos que facilitan la penetración bacteriana por el canal del pezón, al interferir con los mecanismos de defensa naturales y favorecer el crecimiento bacteriano. La mastitis bovina, es reconocida mundialmente como la enfermedad más costosa del ganado lechero, ocasionando graves daños al tejido mamario. Dicho daño puede estar inducido por dos mecanismos principales de muerte celular: necrosis o apoptosis, diferenciadas por los cambios morfológicos, bioquímicos y moleculares que se producen en las células destinadas a morir. Staphylococcus aureus es un patógeno mayor de la GM que causa principalmente mastitis subclínicas y crónicas que responden pobremente a la terapia antibiótica. El objetivo del trabajo fue evaluar cambios en el balance proliferación/apoptosis durante la involución de la GM bovina, en cuartos sanos en relación a infectados crónicos por S. aureus, cuantificando la expresión de PCNA (antígeno nuclear de proliferación celular) por inmunohistoquímica (IHQ), e identificando apoptosis in situ por TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labelling). Se utilizaron vacas Holstein no preñadas, en la etapa final de la lactancia. Se obtuvieron muestras de tejido mamario a los 7, 14 y 21 días luego del último ordeño. Cuartos sanos (n=8) e infectados crónicos por S. aureus (n=8) fueron incluidos en cada grupo (7, 14 y 21 días). Los tejidos fueron incluidos en parafina. Para evaluar la proliferación se realizó IHQ utilizando el anticuerpo primario anti-PCNA clon SC56 y el sistema de revelado estreptavidina-peroxidasa-DAB. Para evaluar apoptosis se realizó la técnica TUNEL utilizando el kit Apop Tag® Plus?Peroxidasa (Chemicon) que permitió la marcación enzimática de la ruptura de las cadenas de ADN y la detección de apoptosis in situ. Para la cuantificación y obtención de los porcentajes de proliferación y apoptosis se empleó el programa Image-Pro Plus 3.0.1 (Media Cybernetic). Para el análisis estadístico de los datos se utilizó ANOVA factorial que evalúa los efectos de la IIM, del tiempo y la interacción. En caso de un efecto significativo del tiempo (p