Evaluación del Crecimiento en Leche con Aditivos y Determinación de la Hidrofobicidad de la Superficie Celular de Bacterias Ácido Lácticas de Origen Aviar

BLAJMAN JESICA; GAZIANO CRISTIAN; ASTESANA DIEGO; FUSARI MARCIA; BERISVIL AYELEN; ZIMMERMANN JORGE ALBERTO; ZBRUN VIRGINA; ROSMINI MARCELO RAUL; FRIZZO LAUREANO

Rosario

Congreso; XV Congreso y XXXIII Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2013

Sociedad de Biología de Rosario

La capacidad de crecimiento en medios de cultivo que puedan ser suministrados a los animales es una de las propiedades tecnológicas que debe tener una cepa probiótica. Por otra parte, el carácter hidrofóbico de la superficie celular es una propiedad probiótica de especial importancia, ya que facilita la adherencia a las células epiteliales del intestino del hospedador. El objetivo del presente trabajo fue evaluar el crecimiento en leche con aditivos de 3 cepas de bacterias ácido lácticas (BAL) de origen aviar (Lactobacillus salivarius DSPV 001P, L. salivarius DSPV 003P y L. agilis DSPV 004P), que habían sido aisladas del tracto gastrointestinal de pollos adultos sanos, y determinar la hidrofobicidad de su superficie celular. Cultivos overnight en caldo MRS de cada cepa fueron sembrados al 1% en tubos conteniendo leche comercial en polvo reconstituida con agua bidestilada (10% p/v) + 5% p/v de extracto de levadura + 0,003% p/v de MnSO4 e incubados a 37ºC durante 24h. Se realizaron diluciones seriadas y siembra en profundidad en placas con agar MRS. Las placas fueron incubadas en aerobiosis a 37ºC por 72h. Posteriormente, se procedió a realizar el recuento de las unidades formadoras de colonias (UFC). Todas las experiencias fueron realizadas por duplicado. El análisis estadístico fue ejecutado mediante el programa SPSS, implementándose ANOVA y Test de Duncan. Para determinar la hidrofobicidad de la superficie celular se empleó la técnica de partición en solventes orgánicos utilizando n-hexadecano. Las células bacterianas presentes en un volumen de 6ml de un cultivo overnight en caldo MRS fueron colectadas mediante centrifugación. El pellet bacteriano fue lavado 2 veces con buffer fosfato salino (PBS) y resuspendido en 6ml del mismo buffer. La densidad óptica a 600nm (DO600nm) fue ajustada al intervalo 0,4 - 0,6. A continuación, 1,5ml de solvente orgánico fueron añadidos y mezclados con 6ml de suspensión bacteriana. Transcurridos 60min, una alícuota de la fase acuosa fue separada con el fin de determinar la DO600nm. El porcentaje de hidrofobicidad (H%) fue calculado utilizando la siguiente ecuación: H%= [(A0 ? A)/A0] x (100) en donde A0 y A representaron la DO600nm antes y después de la extracción con n-hexadecano, respectivamente. De este modo, la disminución del valor de la DO600nm fue usada como una medida del H% de la superficie celular. Con respecto al crecimiento en leche, este fue mayor (P=0,005) para la cepa L. agilis DSPV 004P (9,22 ± 0,064 Log10 UFC/ml), en relación a L. salivarius DSPV 001P (8,81 ± 0,015 Log10 UFC/ml) y L. salivarius DSPV 003P (8,53 ± 0,061 Log10 UFC/ml). En cuanto a la hidrofobicidad, la cepa L. salivarius DSPV 003P mostró un H% de 72%, mientras que las cepas L. salivarius DSPV 001P y L. agilis DSPV 004P mostraron H% de 69% y 63%, respectivamente. Podemos concluir que las cepas en estudio crecen bien en leche con aditivos, lo que permite administrarlas en cantidades suficientes, y presentan niveles de hidrofobicidad medios a altos, relacionado con una buena capacidad de adhesión al epitelio intestinal. No obstante, es necesario estudiar propiedades adicionales a fin de elegir el mejor exponente probiótico.