Cambios histomorfométricos y expresión de colágeno I y PCNA en glándula mamaria infectada crónica por Staphylococcus aureus durante la involución

ANDREOTTI C.S.; PEREYRA E.A.L.; BARAVALLE C.; RENNA M.S.; ORTEGA H.H.; CALVINHO L.F.; DALLARD B.E.

Pilar-Bs.As

Encuentro; XIII Reunión Anual de los Grupos de investigación de Mastitis.; 2013

Universidad del Salvador

El periodo no lactante en vacas lecheras, o periodo de secado, es un determinante importante para la producción de leche en la lactancia siguiente. Durante el mismo la glándula mamaria bovina se somete a una intensa remodelación que involucra dos fases principales, una de involución activa y otra de mamogénesis. Durante la involución temprana de la glándula mamaria bovina el riesgo de infecciones intramamarias (IIM) se ve incrementado, y ha sido relacionado con cambios durante este periodo que facilitan la penetración bacteriana por el canal del pezón, interferencia con los mecanismos de defensa naturales y aumento del crecimiento bacteriano. Además, las IIM presentes al momento del secado pueden persistir a lo largo de este periodo a pesar del uso de antibióticos, llevando a un incremento en las pérdidas de producción de leche en la lactancia siguiente. Staphylococcus aureus es un patógeno mayor de la ubre que causa principalmente mastitis subclínicas y crónicas que responden pobremente a la terapia con antibióticos. El sistema de defensa de la glándula mamaria contra los patógenos causantes de mastitis está mediado por factores inmunológicos innatos y adquiridos asociados a este tejido, que actúan en forma coordinada, siendo la eficiencia de estos mecanismos la que determina la resistencia a nuevas IIM. El objetivo general del trabajo es investigar el rol del sistema inmune en la remodelación de la glándula mamaria bovina durante la involución y caracterizar la respuesta inmune en glándulas mamarias libres de infección y crónicamente infectadas con S. aureus durante este periodo. Nuestra hipótesis de trabajo se fundamenta en que se producirá una respuesta inmune diferencial en animales sanos con respecto a los infectados crónicos por S. aureus en este periodo. Para el desarrollo del trabajo se utilizaron vacas Holstein no preñadas, en la etapa final de la lactancia. Tres meses antes de iniciado el experimento, se determinó el estado infeccioso de los cuartos mamarios a través de análisis bacteriológicos, cada 21 días, de muestras de secreción mamaria. De esta manera, se seleccionaron cuartos mamarios libres de IIM y cuartos mamarios con infecciones crónicas por S. aureus (unidades experimentales). Se obtuvieron muestras de tejido mamario a los 7, 14 y 21 días luego del último ordeño. Cuartos sanos (n=8) e infectados crónicos por S. aureus (n=8) fueron incluidos en cada grupo (7, 14 y 21 días). Los tejidos fueron procesados para la realización de técnicas de inmunohistoquímica (IHQ). Por otro lado, se ha comenzado a tomar muestras de secreción mamaria para técnicas de Western Blot (para evaluar especificidad de anticuerpos utilizados en IHQ) y para RT-PCR en tiempo real, en función de evaluar la cinética de las citoquinas producidas a lo largo de la involución temprana. Hasta el momento, se ha realizado IHQ para identificar y cuantificar diferentes tipos de células que intervienen en la respuesta inmune innata y adaptativa, receptores de la inmunidad innata, citoquinas pro y antiinflamatorias, proteínas secretorias y estructurales, utilizando anticuerpos específicos: Anti CD79 (marcador de linfocitos B), anti CD2 (marcador de linfocitos T), anti CD14 (monocitos/macrófagos), anti TLR-2, anti TLR-4, anti-IL6, anti-IL1α, anti-TNF-α, anti TGF-β1, anti TGF-β2, anti TGF-β3, anti TGF-βR1, anti TGF-βR3, anti lactoferrina bovina y anti-bovine collagen I. Asimismo, se realizaron análisis histomorfométricos con el fin de caracterizar el proceso de remodelación a través de los porcentajes obtenidos de áreas del parénquima y del estroma intra e interlobulillar. Los resultados que se han obtenido hasta la fecha, aportan nuevos datos acerca de la respuesta inmune generada por el huésped en infecciones crónicas por S. aureus durante la involución temprana de la glándula mamaria bovina; y demuestran que una remodelación aberrante de la misma, causada por la IIM podría conducir a una disfunción de la glándula y a una lactación deficiente. Por lo tanto, investigar esta temática, nos permitirá generar conocimientos para el desarrollo de nuevas alternativas de control de la enfermedad que ayuden a disminuir la incidencia de mastitis estafilocócicas en los rodeos. Una comprensión más completa de la patogenia de esta enfermedad, podría tener un impacto profundo en la salud pública y la ganadería de nuestro país y del mundo.