Desarrollo y optimiación de un método para la cuantificación de Efavirenz mediante dried plasma spot

MUHN, MARÍA A; HEIN, GUSTAVO J; MURGUIA, MARCELO C

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; 1er Congreso Argentino de Cromatografía y Técnias Afines; 2013

División Cromatografía (CECROM) de la Asociación Química Argentina

Introducción. El dosaje de numerosas moléculas en muestras de plasma dispensadas en soportes de papel, conocidas como manchas secas de plasma (DPS, del inglés: dried plasma spot), ha tenido una creciente popularidad en la comunidad bioanalítica, clínica y farmacéutica. La técnica DPS ofrece numerosas ventajas respecto a las muestras de sangre entera, plasma o suero, como ser: disminución considerable del costo, ser una técnica ecológica, con facilidad de almacenamiento y transporte. (Barfield y Wheller, 2011). El Efavirenz (EFV) actúa como inhibidor de la transcriptasa reversa no análogo a los nucleósidos. Este fármaco es ampliamente utilizado en los países desarrollados, por su fácil administración, eficacia y tolerancia a largo plazo (Burger, 2010). El objetivo de este trabajo fue diseñar un método confiable para la cuantificación de EFV en plasma humano, empleando muestras dispensadas en DPS y la tecnología de LC-MS/MS. Materiales y Métodos. Los soportes utilizados fueron tarjetas 903®, FTA DMPK-A, FTA DMPK-B, FTA DMPK-C (Whatman).  El sistema de LC-MS/MS consistió de un cromatógrafo líquido ultra rápido (Shimadzu), columna Hypersil Gold (C18, 100 x 2.1 mm, 3 µm) y un espectrómetro de masas de triple cuadrupolos API 3200 (ABSciex) con interfaz de ionización por electrospray (ESI). Se trabajó en modo MRM, siendo las transiciones: 316.1/244.2, para Efavirenz  y 568.4/467.3, para Nelfinavir. La fase móvil fue Acetonitrilo/acetato de amonio 10 mM en agua (isocratico) y el flujo fue de 0.35 ml/min. Resultados y Discusión. Se evaluaron los diferentes soportes, resultando las recuperaciones de: 67, 83, 17 y 84%, para 903®, FTA DMPK-A,  FTA DMPK-B y FTA DMPK-C, respectivamente. Los soportes FTA presentaron un efecto matriz significativo, por lo tanto se decidió utilizar los soportes 903®. Para evaluar la extracción del analito del soporte, se realizaron estudios con plasmas fortificados con 2000 y 4300 ng/mL de EFV, obteniendo valores de recuperación de 95 y 87%, respectivamente. Se realizaron curvas de calibrado en solución, plasma y plasma dispensado en soportes 903®, mostrando una linealidad en el rango: 103 a 8640 ng/mL para solución y plasma, y 259 a 6480 ng/mL para los soportes. Conclusión. El diseño de la presente técnica analítica, permite la determinación de EFV a muy bajas concentraciones, representando un método sencillo, económico y ecológico. Con ventajas adicionales como el transporte y almacenamiento de las muestras. Referencias. 1- Barfield, M., & Wheller, R. 2011. Use of Dried Plasma Spots in the Determination of Pharmacokinetics in Clinical Studies: Validation of a Quantitative Bioanalytical Method, 83(1), 118-124. 2- Kromdijk, W., Mulder, J. W., Rosing, H., Smit, P. M., Beijnen, J. H., & Huitema, A. D. R. 2012. Use of dried blood spots for the determination of plasma concentrations of nevirapine and efavirenz. The Journal of antimicrobial chemotherapy, 67(5):1211-6. 3- Burger, D. M. 2010. The role of therapeutic drug monitoring in pediatric HIV/AIDS. Therapeutic drug monitoring, 32(3): 269-272.