DISEÑO Y VALIDACIÓN DE FENITOÍNA EN FLUÍDOS BIOLÓGICOS POR LC-ESI-MS/MS

BALDO, MATÍAS N; HEIN, GUSTAVO J; MURGUIA, MARCELO C

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; 1er Congreso de Cromatografía y Técnicas Afines; 2013

División Cromatografía (CECROM) de la Asociación Química Argentina

Introducción. En la práctica clínica el Monitoreo Terapeútico de Drogas (MTD) con muestras de sangre ha sido de gran utilidad para el control de fármacos como anticonvulsivantes, especialmente en pacientes con epilepsia, sin embargo, progresivamente ha ido cobrando una mayor relevancia la implementación del MTD a partir de muestras de saliva[1]. La fenitoína (PHT) integra la familia de los anticonvulsivantes y debido a su estrecho margen terapéutico, es muy importante monitorearla en forma constante(2,3). Los bajos niveles de este principio activo en estas matrices, representa una dificultad analítica que demanda el empleo de tecnologías de avanzada para alcanzar los límites requeridos. Es por ello, que los objetivos de este trabajo fueron diseñar y validar un método analítico, por medio de LC-ESI-MS/MS, que posibilite la determinación de los niveles de PHT en dos matrices biológicas como son plasma y saliva, para su potencial aplicación en el MTD y en estudios de bioequivalencia. Materiales y Métodos.El sistema de LC-MS/MS consistió de un HPLC (Shimadzu), columna C18, 100 x 2.1 mm, 3 µm de tamaño de partícula y un espectrómetro de masas de triple cuadrupolos API 3200 (ABSciex) con interfaz de ionización ESI. Se trabajó en modo MRM siendo las transiciones: 251.1/102.0; 251.1/208.0 para PHT, y 316.0/269.9 para el Estándar Interno. La fase móvil utilizada fue ACN/acetato de amonio 3 mM en agua, empleando un sistema de gradiente. La preparación de muestra consistió en una etapa de extracción por precipitación de proteínas y la posterior dilución con agua. Resultados. El método es lineal (>0.999) en las dos matrices analizadas. El LOD de la metodología propuesta fue de 15 y 1.5 µg/L y el LOQ de 40 y 5 µg/L para plasma y saliva respectivamente. El método presentó una recuperación entre el 70-105%, el coeficiente de variación (CV%) para  la precisión fue <16% y la exactitud de  93-120% en todos los rangos de concentración estudiados en ambas matrices. Además, se analizó la estabilidad de la PHT en muestras, a corto y largo plazo. A corto plazo, a través de tres ciclos de congelado-descongelado y en dos niveles de concentración (bajo  y alto), arrojó un valor de Bias < 15%. Mientras que la estabilidad a largo plazo (60 días en plasma y 30, 60 y 180 días en saliva), a través de controles de calidad en tres niveles de concentración (bajo, medio y alto), mostró un valor de Bias < 20%, para los tres niveles de concentración en ambas matrices. Conclusiones. El diseño del presente método analítico permitió la detección y cuantificación de muy bajas concentraciones de PHT en plasma y en saliva, representando un método sencillo, rápido, económico y confiable. La LC-ESI-MS/MS posibilita el dosaje de bajos niveles de principios activos en matrices no convencionales como la saliva y ofrece simultáneamente las ventajas atribuidas a la bioseguridad y al uso de técnicas de extracción no invasivas. Referencias. (1)Liu, H; Delgado, MR. Therapeutic Drug Concentration Monitoring Using Saliva Samples: Focus on Anticonvulsants. 1999. Clin. Pharmacokinet., 36(6): 453?470. (2)McNamara, JO. Fármacos Eficaces para el Tratamiento de las Epilepsias. En Las Bases Farmacológicas de la Terapéutica (9na Edición); Goodman & Gilmans, Eds.; McGraw-Hill Interamericana S.A.: Madrid. 1996. Vol. I: 491-519.  (3)Hayes, G; Kootsikas, ME. Reasessing the lower end of the phenytoin therapeutic range: a review of the literature. 1993. Annals of Pharmacotherapy, 27: 1389-1392.