Resistencia a Colistina: una amenaza para la salud humana y animal

BERTONA, M.N; MARTI, L.E.; SIGNORINI, M.L.; ANGONOA, P.B.; ACOSTA, F.; ZIMMERMANN, J.A.; LENCINA, F.A.; STEGMAYER, A.; SOTO, L.P.

Esperanza

Jornada; X Jornada de Difusión de la Investigación y Extensión; 2022

Facultad de Ciencias Veterinarias - Universidad Nacional del Litoral

El aumento global de la Resistencia a los Antimicrobianos (RAM) constituye una importante amenaza para la salud y medicina tanto humana como animal, poniendo en peligro la seguridad de nuestros alimentos y del medio ambiente. La colistina (del grupo de las polimixinas) es un antibiótico que ha sido empleado en animales de granja para prevenir infecciones y promover su crecimiento; en tanto que en medicina humana se lo emplea a modo de tratamiento de última línea para infecciones producidas por microorganismos multirresistentes. Recientemente se ha detectado un mecanismo de resistencia a este antibiótico a través de plásmidos, particularmente al gen plasmídico mcr-1 (Mobile Colistin Resistance) y sus variantes (mcr- 2, mcr-3, mcr-4, mcr-5 entre otras) por lo que las bacterias pueden compartir y diseminar fácilmente la resistencia a otras. Frente a esta situación en Argentina, el Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria (SENASA) prohibió en el año 2019 la elaboración, distribución, importación, uso y tenencia de productos veterinarios en todo el país, que contengan en su formulación el principio activo colistina y sus sales. Sin embargo, se desconoce cuál fue el impacto que generó la prohibición del uso de este antimicrobiano en aves, sobre la persistencia de cepas de E. coli resistentes a colistina en pollos de engorde. Es por todo esto, que los objetivos de éste trabajo fueron a) evaluar la presencia de E. coli resistentes a colistina presentes en ciego de pollos de engorde e b) identificar el mecanismo plasmídico de resistencia involucrado (gen mcr) en los aislamientos resistentes. Para esto, se obtuvieron muestras de contenido intestinal de pollos de engorde procedentes de un frigorífico cercano a la Facultad de Ciencias Veterinarias - UNL. Se tomó 0,5 g de contenido cecal, el cual fue colocado en 4,5 ml de agua de peptona estéril. Dicha suspensión fue sembrada utilizando la técnica de la microgota (3 gotas de 20 μl) en media placa de agar VRBA con una concentración de 2 μg/ml de colistina que fue agregada directamente al medio con el propósito de direccionar la búsqueda y aislar microorganismos resistentes. Las placas fueron incubadas a 37° C por 24 h. Las colonias presuntivas de E. coli obtenidas fueron repicadas para su aislamiento en otras placas de agar VRBA y posteriormente los aislamientos fueron congelados en medio crioprotector a -80°C. Mediante PCR se realizó la confirmación genotípica de los aislamientos, con la utilización de cebadores dirigidos al gen que codifica la proteína de estrés universal (uspA)1. Para ello, se utilizó el protocolo descripto por Chen y Griffiths (1998)1. Posteriormente, se evaluó la resistencia fenotípica a colistina utilizando el Método de Screening ?COLISTIN AGAR-SPOT? (Servicio Antimicrobianos, INEI ANLIS ?Dr. Carlos G. Malbrán?)2. Luego, a las cepas que presentaron resistencia a colistina según el método de screening se las sometió al estudio de PCR para determinar la presencia del gen plasmídico mcr y sus variantes siguiendo el protocolo detallado por Rebelo y colaboradores (2018). Se procesaron en total 74 muestras de ciego de pollos, de las cuales se obtuvieron 45 cepas presuntivas de E. coli de las cuales 19 fueron confirmadas por PCR, es decir un 25,67% (19/74) del total de muestras. Del total de E. coli confirmadas, 2 (10%) presentaron resistencia a colistina (según método COLISTIN AGAR- SPOT) y ninguna de ellas presentó el gen mcr-1.