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Debido a las crecientes exigencias de los mercados y consumidores, se están desarrollando métodos alternativos para el control de fitopatógenos, que utilizan productos de origen natural para sustituir parcial o totalmente a los químicos. El sobrenadante concentrado de cultivos de una bacteria GRAS, posee actividad fungicida frente a patógenos de soja y frutos cítricos. El objetivo del presente trabajo fue estudiar estrategias para optimizar la actividad fungicida del sobrenadante, variando las condiciones ambientales del proceso de producción, empleando el diseño factorial de Plackett-Burman. Se seleccionaron variables: agitación, composición del medio de cultivo y tamaño del inóculo (niveles bajo y alto). Se determinaron concentración celular en g(peso seco)/mL, y actividad antimicrobiana (UA/mL). Se evaluó la capacidad de biocontrol de los sobrenadantes (Sa), por contacto directo en conidios de Fusarium sp. En procesos con medio estándar y medio mínimo agitados (MEA y MMA) la concentración celular fue 0,0023 y 0,0009 g/mL, respectivamente, la actividad fungicida 50 UA/mL para MEA, 20 UA/mL para MMA. En los procesos estáticos la actividad fue 0 (cero) para ambos medios. Los conidios tratados con Sa obtenidos en MEA y MMA (40 UA/mL), no germinaron luego de 72 h de incubación, a diferencia del testigo negativo. El análisis del diseño factorial demostró que la agitación y la composición del medio de cultivo, favorecen el crecimiento celular y la capacidad fungicida de Sa. Este estudio resultó de interés en el escalado del proceso, para la formulación de un ?producto fitosanitario?, factible de ser ensayado en control biológico a campo.