Relación entre el consumo de glucosa y el ATP durante la maduración de los ovocitos in vitro

PAZ MATIAS; ALVAREZ GABRIEL; GUTNISKY CYNTHIA; CETICA PABLO

San Miguel de Tucumán

Congreso; XVII Congreso Argentino de Medicina Reproductiva SAMeR 2016; 2016

Sociedad Argentina de Medicina Reproductiva

Durante la maduración in vitro la glucosa es la principal fuente de energía para el complejo ovocito-cumulus (COC). El ATP es efector alostérico negativo de la principal enzima reguladora de la vía glucolítica, además de ser la molécula que mejor representa la alta carga energética de la célula. El objetivo del trabajo fue evaluar la relación entre el ATP y el consumo de glucosa en el COC durante la maduración in vitro. Se desarrolló un estudio experimental con diseño completamente aleatorizado. Se utilizó como modelo el experimental COC porcino. Los COCs inmaduros se obtuvieron por aspiración de folículos antrales (3-8 mm de diámetro) de ovarios de cerdas faenadas. La maduración se llevó a cabo durante 48 hs en atmósfera humidificada con 5% de CO2 a 39°C en medio 199 (control) suplementado con 10 UI/ml de FSH + 10 UI/ml de LH, FSH + LH + 0,1 mM ATP o FSH + LH + 1 mM ATP. Se determinó mediante espectrofotometría la concentración de glucosa remanente en el medio de cultivo una vez finalizada la maduración y mediante quimioluminiscencia el contenido de ATP endógeno del COC. Las comparaciones estadísticas se realizaron mediante la prueba de ANOVA de una vía. El mayor consumo de glucosa por COC se observó en presencia de gonadotrofinas, no se consiguió inhibición con ATP 0, 1mM, pero con ATP 1 mM el consumo disminuyó hasta el mismo valor que el control sin gonadotrofinas (65,2 ± 4,9, 63,3 ± 5, 25,8 ± 3,5 y 25,4 ± 4,5, nmol COC-1, respectivamente, p>0,05). El contenido de ATP endógeno del COC fue mayor luego de 48 hs de maduración con gonadotrofinas (0,046 ± 0,008 gonadotrofinas vs. 0,027 ± 0,007 control, pmol COC-1, p<0,05). Adicionalmente, se evaluó el consumo de glucosa cada 24 hs prolongando el tiempo de cultivo hasta las 72 hs con el objetivo de evaluar el efecto del aumento del ATP endógeno en el consumo de glucosa. No se observó diferencia en el consumo de glucosa entre las 0-24 hs, 25-48 hs o 49-72 hs de cultivo in vitro (37,2 ± 4,7, 36,5 ± 3,8 y 39,7 ± 5,1, nmol COC-1, respectivamente). Las gonadotrofinas estimularían el consumo de glucosa durante el cultivo in vitro, lo que elevaría la carga energética de las células al aumentar el contenido de ATP del COC. Sin embargo, a pesar de poder inhibirse el consumo de glucosa mediante el agregado de ATP al medio de maduración, el incremento de ATP endógeno no estaría produciendo inhibición en la utilización de glucosa por el COC durante la maduración in vitro.