Contenido de ATP del ovocito bovinodurante la maduración in vitro

GIL VICTOR; GUTNISKY CYNTHIA; CETICA PABLO; BREININGER ELIZABETH

Jornada; VI Jornadas de Jóvenes Investigadores; 2016

Facultad de Ciencias Veterinarias- UBA

El objetivo de este trabajo fue evaluar el impacto de la vía glucolítica y de la vía de β-oxidación de ácidos grasos sobre el contenido de ATP del ovocito y su relación con el proceso de maduración en la especie bovina. Los complejos ovocito-cumulus (COCs) se obtuvieron por punción aspiración de ovarios provenientes de vacas de faena. Se seleccionaron aquellos COCs con cumulus denso y compacto. Los mismos fueron madurados en medio 199 con 50 µg/ml de sulfato de gentamicina, 5 % de suero fetal bovino (SFB), en presencia (Control) y ausencia (Control ?H) de FSH y LH, bajo aceite mineral a 39ºC, 5 % CO2 en aire y 100 % de humedad durante 22 hs. El medio fue suplementado con el inhibidor de la vía glucolítica, fluoruro de sodio (NaF), y con el inhibidor y estimulador de la β-oxidación de ácidos grasos, etomoxir y L-carnitina, respectivamente. Se determinó el contenido de ATP en ovocitos denudados inmaduros y madurados in vitro utilizando un kit comercial basado en la reacción de la luciferina-luciferasa (Bioluminescent Assay, Kit, Sigma). La maduración meiótica se evalúo por la aparición de la placa cromosómica en metafase II a través de la tinción de Hoechst Se utilizaron entre 30 y 40 COCs por tratamiento. Se observó un descenso significativo de ATP al finalizar la maduración in vitro en el grupo Control ?H, mientras que en el grupo Control no se observaron diferencias respecto del grupo de ovocitos inmaduros (0,27±0,08; 0,60±0,08 y 0,70±0,09 pmoles de ATP/ovocito, repectivamente). La suplementación del medio de maduración con los inhibidores NaF y etomoxir produjo una disminución significativa en el contenido de ATP (0,18±0,04 y 0,21±0,04 pmoles de ATP/ovocito, respectivamente vs control, 0,49±0,07 pmoles de ATP/ovocito) y en la maduración nuclear de los ovocitos respecto al control, mientras que la adición de L-carnitina no modificó el contenido de ATP (0,39±0,05 pmoles de ATP/ovocito) ni la maduración nuclear de los ovocitos. De estos resultados se desprende que las gonadotrofinas inducen un incremento en el contenido de ATP durante la maduración, probablemente por estimular vías metabólicas de producción de ATP, siendo el contenido de ATP del ovocito dependiente tanto de la vía glucolítica como de la β-oxidación de los ácidos grasos. También se observó que la maduración nuclear de los ovocitos es un proceso que se encuentra relacionado con el contenido de ATP de la célula en la especie bovina.