La enzima lactato deshidrogenasa participa en la maduración in vitro de ovocitos porcinos

BREININGER E; ALVAREZ G; GUTNISKY C; CETICA PD

Simposio; XI Simposio Internacional de Reproducción Animal; 2015

El objetivo del presente trabajo fue evaluaren complejos ovocitos-cumulus (COCs) porcinos la actividad de la enzima lactato deshidrogenasa (LDH; EC 1.1.1.28) y su participación en la maduración in vitro (MIV). El sistema utilizado para la MIV en esta especie no se encuentra del todo estandarizado. Estos resultados se deben en parte al desconocimiento de los requerimientos metabólicos específicos de los COCs en esta especie. Los complejos ovocitos-cumulus (COCs) fueron obtenidos por aspiración de folículos antrales (3-8mm) de ovarios provenientes de cerdas de faena. La maduración se realizó en medio 199 suplementado con gonadotrofinas, durante 48 horas a 39ºC y 5% CO2 en aire humidificado. Los COCs inmaduros y madurados in vitro se resuspendieron en agua destilada, sonicaron (4 min), centrifugaron (17000xg, 20 min, 4°C) y la actividad enzimática se determinó en los sobrenadantes por espectrofotometría.La unidad enzimática (U) se definió como la cantidad de enzima que cataliza la oxidación de 1 μmol de NADH/minuto.Para evaluar la actividad específica (AE=U/mg proteína) se determinó el contenido proteico de los COCs por el método de Lowry. La actividad enzimática en ovocitos inmaduros y madurados in vitro se expresó como media±SD en U/COC y U/mg proteínay se comparó por el test de Student. Para evaluar la participación de esta enzima en la MIV, el medio de maduración se suplementó con distintas concentraciones de oxamato de sodio (OXA; 1 ? 50 mM), el cual es un inhibidor farmacológico de la enzima LDH. La maduración nuclear se evaluó por presencia de la placa cromosómica en metafase II. La vitalidad de los COCs se evaluó por la coloración de diacetato de fluoresceína. Los porcentajes se compararon por la prueba de Chi-cuadrado.Las U de LDH fueron de (1,26±0,36) 10-4 y (1,22±0,24) 10-4para COCs inmaduros y madurados in vitro, respectivamente (P>0,05). La actividad específica fue de (3,77±0,60) 10-2 y (1,40±0,65) 10-2 para COCs inmaduros y madurados in vitro, respectivamente (P