Actividad y regulación de las enzimas claves de la glucolisis y vía de las pentosas fosfato en COCs porcinos

VECCHI GALENDA B; ALVAREZ G; GUTNISKY C; DALVIT G; BREININGER E; CETICA PD

Congreso; XV Jornadas Anuales de la Sociedad Argentina de Biología; 2013

Los resultados subóptimos de la maduración in vitro (MIV) de ovocitos porcinos se debe en parte al desconocimiento de los requerimientos metabólicos de los complejos ovocito-cumulus (COCs). El objetivo fue estudiar en COCs porcinos la actividad y regulación de las enzimas claves de la vía glucolítica (Fosfofructoquinasa 1, PFK) y de la vía de las pentosas fosfato (Glucosa 6-fosfato deshidrogenasa, G6PDH). Los COCs inmaduros se resuspendieron en agua destilada, se sonicaron (4 min, 50%), se centrifugaron (17000xg, 20 min, 4°C) y las actividades enzimáticas se determinaron en los sobrenadantes por espectrofotometría. Para la PFK la unidad enzimática (U) se definió como la cantidad de enzima que cataliza la formación de 1 µmol de Fructosa 1,6-bisfosfato/min, midiéndose como la oxidación de 2 µmoles de NADH/min. Para la G6PDH la U se definió como la cantidad de enzima que cataliza la reducción de 1 μmol de NADP/minuto. Las unidades enzimáticas de FFK y G6PDH fueron de 2,13±0,18 y 1,52±0,52 x10-5/COC, respectivamente. El agregado de moduladores (AMP, ATP / NADP, NADPH) modificó significativamente la actividad de ambas enzimas. Se observó mayor actividad de FFK respecto de G6PDH, sugiriendo mayor participación de la vía glucolítica en el metabolismo de la glucosa. La regulación enzimática fue similar o lo observado para otros tipos celulares. Nuestros resultados contribuyen a dilucidar el perfil metabólico de los COCs porcinos permitiendo determinar sus requerimientos nutricionales en la MIV.