Obtención de proteínas de plasma seminal ovino con afinidad por proteínas de membrana de espermatozoides de carnero crioconservados.

BERNARDINI, AL; CESARI, A

Santiago del Estero

Congreso; 30 Congreso Argentino de Producción Animal; 2007

Asociación Argentina de Producción Animal

Obtención de proteínas de plasma seminal ovino con afinidad por proteínas de membrana de espermatozoides de carnero crioconservados Ram seminal plasma proteins that interact with membrane proteins from cryopreserved sperm Bernardini, A. L. & Cesari, A. Instituto de Investigaciones Biológicas-CONICET, Universidad Nacional de Mar del Plata. E-Mail: alebernardini@gmail.com   La crioconservación del semen reduce su capacidad fertilizante, al inducir cambios en la membrana espermática que reproducen las características de espermatozoides que han iniciado la capacitación. Los espermatozoides ovinos son más sensibles a la congelación que los de otras especies, obteniéndose tasas de fertilidad más bajas. La posibilidad de revertir el estado procapacitado del espermatozoide por algunas horas alargaría su vida media, facilitando su pasaje a través del cérvix y mejorando su fertilidad. Otro factor que produce daños en la membrana, es el estrés oxidativo potenciado también por la congelación-descongelación del semen, induciendo la capacitación de manera prematura. Varios estudios han demostrado que componentes del plasma seminal (PS) inhiben la capacitación y tienen la capacidad de revertir los efectos deletéreos producidos por el shock-térmico de los espermatozoides de mamíferos, mejorando así su viabilidad. Por ello es importante identificar los componentes del PS involucrados en la reversión de la capacitación de los espermatozoides y su consecuente aumento de viabilidad. Con el objetivo de identificar las proteínas del PS que interaccionan con proteínas de superficie espermática, se realizó un ensayo de interacción proteína-proteína entre espermatozoide y PS. Este experimento consistió en inmovilizar proteínas aisladas de la superficie espermática de ovino (100 µg) en membranas de nitrocelulosa y PVDF. Para permitir la interacción de estas proteínas con proteínas de PS, luego de ser bloqueadas, las membranas se incubaron con 500 µg de PS ovino obtenido en otoño (estación reproductiva). Se probaron dos bloqueantes: BSA y polivinil pirrolidona (PVP). Las membranas se lavaron para eliminar las proteinas incapaces de interactuar (fraccion no retenida), luego se procedió a eluir las proteíns de PS con afinidad por las proteínas de superficie espermática aumentando la fuerza iónica (1,5 M NaCl) (fracción retenida). Las fracciones retenida y no retenida fueron separadas por electroforesis en una dimensión en geles de poliacrilamida 15%. Las membranas de PVDF retuvieron más proteínas que las de nitrocelulosa. En los ensayos en que se utilizó BSA como bloqueante, se obervaron bandas inespecíficas, siendo el PVP el mejor bloqueante. El analisis electroforético de la fracción retenida mostró 10 bandas mayoritarias, correspondientes a proteínas de PS afines a proteínas de membrana de espermatozoide (190, 170, 105, 93, 90, 75, 73, 64, 25, 20 y 14 kDa). Las  dos proteínas de menor peso molecular se corresponden con RSVP14 y RSVP20 descriptas por otros autores, siendo las restantes posibles proteinas no reportadas hasta el momento. En conclusión, se detectaron 10 proteínas del plasma seminal interactuando con proteinas de la superficie espermática de las cuales, dos habían sido ya desciptas por otros autores, y las ocho restantes son detectadas por primera vez. Palabras clave: Ovinos, Plasma seminal, espermatozoide, criconservacion Key words: Ram, Seminal plasma, spermatozoa, cryopreservation