INVESTIGADORES
CESARI Andreina
congresos y reuniones científicas
Título:
Búsqueda de serin proteasas en espermatozoides de mamíferos a través de proteómica
Autor/es:
TEJÓN, G. P.; CESARI, A
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; LIII Reunión Científica Anual SAIC; 2008
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)
Resumen:
Las serin proteasas (SP) tienen un rol importante durante las diferentes etapas de la fertilización, ya que este proceso es afectado en presencia de inhibidores específicos. Dichas enzimas se han reportado en citosol, fracción soluble del acrosoma, membrana plasmática y membranas acrosomales de espermatozoides de varias especies de mamíferos, relacionándose su localización con su posible función y mecanismo de regulación. Con el objetivo de identificar todas las SP de espermatozoides de ratón presentes en membrana y en la fracción soluble se realizó un fraccionamiento subcelular y se utilizó una columna de afinidad de p-amino-benzamidina agarosa con el fin de enriquecer en SP cada una de las fracciones subcelulares. Las proteínas eluídas fueron separadas en geles de poliacrilamida en 1 dimensión. Para la identificación se utilizaron dos estrategias: a) se analizó por espectrometía de masa (MS/MS) la calle completa de las elusiones obtenidas para cada una de las fracciones subcelulares seccionada en 24 fragmentos; b) las proteínas teñidas por nitrato de plata se cortaron y se analizaron por MS. Las proteínas identificadas contrastando con la base de datos de Mus musculus mediante el programa MASCOT y los resultados fueron analizados en búsqueda de dominios conservados (Specialized BLAST, NCBI) y homología con SP (MEROPS). Se identificaron 3 SP en la fracción de proteínas de membrana de espermatozoides de ratón, las cuales no habían sido reportadas anteriormente en testículo ni en células germinales y 3 proteínas con baja homología con SP. Curiosamente, no se identificó ninguna SP reportada en espermatozoides de ratón. En cambio, en ambas fracciones subcelulares se identificaron 5 inhibidores de SP y 3 proteínas con dominios de afinidad por SP. Esto podría explicarse por la formación de complejos macromoleculares que incluyen SP e inhibidores en la superficie espermática y en la fracción soluble, los cuales constituirán la base de la regulación de la proteólisis.