Relación entre el día de protrusión y el sexo de embriones bovinos producidos in vitro.

KAISER GG; MUCCI N; MUTTO A; CESARI A; ALBERIO RH

Mar del Plata

Congreso; 29º Congreso Argentino de Producción Animal; 2006

Asociación Argentina de Producción Animal

Existen trabajos que demuestran que embriones bovinos macho producidos in vitro inician su proceso de división celular antes que los hembra, y a su vez presentan una mayor velocidad de desarrollo. Sin embargo, no se dispone de información referida al impacto del sexo embrionario sobre el momento de la protrusión. El propósito del presente trabajo, fue evaluar la posible relación entre el sexo de los embriones bovinos producidos in vitro y el día de su protrusión. Esto permitiría disponer de una metodología de transferencia de embriones con una alta proporción de sexo predefinido sin necesidad de efectuar técnicas invasivas para su determinación. Seiscientos veintiséis ovocitos, obtenidos a partir de ovarios de matadero, fueron madurados in vitro en medio TCM-199 modificado + 10% de suero de vaca en celo (SVC) y 0,01 UI/ml de FSHrh en estufa a 38,5 ºC, 5% CO2 y humedad a saturación. Luego de 24 hs de maduración se efectuó la fecundación con semen congelado-descongelado (2x106 espermatozoides/ml). Los presuntos cigotos fueron cultivados en medio CR1aa en estufa a 38,5ºC, 5% CO2, 5% O2 y humedad a saturación hasta el día 11 post-inseminación (PI). Todos los embriones protruídos al día 8, 9 y 11 de cultivo fueron congelados en D-PBS + 0,4 % de albúmina bovina a – 20 ºC hasta la determinación del sexo mediante nest PCR. Los cebadores externos e internos utilizados fueron diseñados en base a las secuencias humanas de ZFX y ZFY. Se realizaron dos rondas de PCR. El producto final fue digerido con las enzimas de restricción FokI and PstI (New England Biolabs, MA, USA)  y analizado en geles de agarosa 2% con bromuro de etidio. Los embriones machos presentaron bandas de 365, 279 y 89 pares de bases (pb), mientras que las hembras presentaron bandas de 365 y 178/187 pb. El porcentaje de embriones de cada sexo que protruyeron el día 8, 9 y 11 PI fue analizado como variable categórica mediante el procedimiento CATMOD del paquete estadístico SAS. Se produjeron 219 embriones (35 % de producción respecto a los ovocitos puestos a madurar) los cuales prosentaron un 57,5 % de protrusión total, 47,6 % machos y 52.4 % hembras evaluada hasta el día 11 PI. No se observaron diferencias significativas en el porcentaje de embriones macho/hembra en ninguno de los días analizados (Tabla 1) Tabla 1. Sexo de embriones bovinos producidos in vitro protruídos los días 8, 9 y 11 pos inseminación. Sexo de los embriones Número de embriones protruídos de día 8 (%) Número de embriones protruídos de día 9 (%) Número de embriones protruídos de día11 (%) Macho 23 (48,9) 27 (42,8) 10 (62,5) Hembra 24 (51,1) 36 (57,2) 6 (37,5) Se observaron porcentajes de protrusión semejantes a los de gestación esperados luego de la transferencia en fresco de embriones bovinos producidos in vitro. Al mismo tiempo, la relación macho/hembra fue similar a la fisiológica. A partir de los datos presentados podemos concluir que el sexo de los embriones bovinos producidos in vitro no influiría sobre el momento de protrusión.