Efecto de un concentrado de humo de cigarrillo sobre un modelo in vitro de epitelio respiratorio asmático: respuesta al budesonide y estrés oxidativo

DUGOUR, ANDREA V.; CALELLO, MARIANA; CLAUZURE, MARIÁNGELES; FIGUEROA, J M; ANGEL GABRIEL VALDIVIESO; SANTA COLOMA TA,

Buenos Aires

Congreso; LV Reunón Anual Sociedad Latinoamericana de Investigación Pediátrica; 2017

EFECTO DE UN CONCENTRADO DE HUMO DE CIGARRILLO SOBRE UN MODELO IN VITRO DE EPITELIO RESPIRATORIO ASMATICO: respuesta al budesonide y estrés oxidativo. Dugour AV1, Valdivieso AG2, Clauzure M2, Calello M,1Santa Coloma TA2,Figueroa JM1, 1Centro de Biología Respiratoria-Fundación Pablo Cassara.2Instituto de Investigaciones Biomédicas (BIOMED, CONICET). Universidad Católica Argentina (UCA). Buenos Aires. ArgentinaIntroducción: la exposición al cigarrillo en niños asmáticos se asocia con mayor severidad y peor respuesta al tratamiento; el estrés oxidativo sería la causa de este deterioro. Se ha descripto que el epitelio respiratorio es clave en la inflamación y la remodelación bronquial en el asma. Las células Calu-3 (línea de epitelio respiratorio humano) cultivadas en monocapa en interface líquido-aire remedan el epitelio bronquial y al ser estimuladas con IL-1β y H2O2 responden con un perfil de citoquinas similar al del asma. Objetivos: 1) evaluar en un modelo in vitro de epitelio con asma el efecto de la adición de un concentrado de humo de cigarrillo (CHC) sobre la liberación de IL-6, IL-8 (citoquinas ?inflamatorias?), VEGF (citoquina ?remodeladora?), y sobre la actividad del CFTR; 2) evaluar la respuesta al Budesonide (BUD); y 3) evaluar la participación del estrés oxidativo.Material y Métodos: se cultivaron células Calu-3 y se dividieron en grupos. Un grupo ?control?, y grupos experimentales en los que se agregó al medio de cultivo IL-1β 50 ng/ml + H2O2 100 µM (?asma?) o IL-1β 50 ng/ml + H2O2 100 µM + CHC 100 µg/ml (?asma + cigarrillo?). Luego de 4 hs el medio fue reemplazado por medio solo (control) o con BUD (?células tratadas?). A las 24 hs se cuantificó en el sobrenadante IL-6, IL-8 y VEGF (ELISA). Se evaluó en las células la expresión del gen CFTR (qRT-PCR) y los niveles de estrés oxidativo (cuantificación de ROS-sonda fluorescente). Para evaluar mejor el estrés oxidativo se repitió, en otros grupos de células, lo ya descripto agregando N-Acetyl Cisteína (NAC=antioxidante) junto a cada estímulo. Análisis estadístico: Test de Comparaciones Múltiples de Newman-Keuls. Resultados: El epitelio ?asmático? libera más IL-6 (6,9 veces), IL 8 (5,3 veces) y VEGF (121%) que el sano o control; la adición de CHC (?asma + cigarrillo?) aumentó significativamente estas citoquinas (IL-6: 13,7 veces y IL-8: 7,4 veces, VEGF: 152%), junto con un descenso significativo en la expresión del mRNA del CFTR, y un aumento significativo de los ROS (35.22 ± 9.50 %, p