Aplicación de fluorescencia de rayos X por reflexión total en la cuantificación de elementos traza minerales en órganos linfáticos secundarios (OLS) de un modelo murino de hipertiroidismo experimental.

CREMASCHI, G.; TORTI, H.; KLECHA, A.; BARREIRO ARCOS, M.L.; CERCHETTI, L.; COSTILLA M.; MACRI DELBONO, R.

Buenos Aires

Workshop; XX Jornadas de la Escuela J.J. Giambiagi "Fisicos en el mundo de la salud: un encuentro trans diciplinario"; 2018

Facultad de Ciencias Exactas y Naturales (UBA)

Introducción: La fluorescencia de rayos X total (FRXT) es una de las mejores técnicas analíticas empleadas para la identificación y cuantificación de elementos químicos. Consiste en la irradiación con rayos X de una muestra, produciendo la excitación de sus átomos y generando un espectro de emisión característico de cada elemento. Es una variación del método de FRX convencional ya que emplea haces rasantes con un ángulo inferior a 0.1°, reduciendo el ruido de fondo y aumentando la sensibilidad de la medición. Los niveles de detección se encuentran en el orden de magnitud de μg/l. En este trabajo, empleamos la FRXT para determinar la concentración de elementos traza minerales que son esenciales para la actividad biológica de enzimas antioxidantes. Recientemente, hemos comprobado que el hipertiroidismo incrementa en los OLS, las especies reactivas del oxígeno (ROS) producidas a nivel mitocondrial, como consecuencia de una mayor tasa metabólica celular. La función de las enzimas antioxidantes es detoxificar las ROS y mantener el estado redox celular, y para ello requieren de la presencia de minerales que utilizan como cofactores e intervienen en los procesos de óxido-reducción. Objetivos: Cuantificar la concentración de los cofactores minerales de las enzimas glutatión peroxidasa (GPX), catalasa (CAT) y superóxido dismutasa (SOD) y correlacionar estos datos con la actividad biológica de dichas enzimas, en OLS (ganglios linfáticos y bazo) de animales hipertiroideos y controles eutiroideos. Metodología: El modelo de hipertiroidismo fue desarrollado en ratones Balb/c de 2 meses de edad, mediante el tratamiento con tiroxina (T4) en el agua de bebida (12 mg/l), por 30 días. El dosaje de los niveles plasmáticos de hormonas tiroideas se realizó mediante la técnica de radioinmunoensayo. Los elementos traza minerales fueron cuantificados a partir de muestras de OLS mineralizadas, empleando la técnica FRXT y la actividad enzimática fue determinada por métodos espectrofotométricos. Resultados: Los estudios de FRXT mostraron que el hipertiroidismo indujo una disminución de los cofactores selenio, hierro y zinc tanto en tejido ganglionar como el bazo y un aumento significativo de estos minerales en fémur. Encontramos una disminución en la actividad de SOD y un incremento en la actividad de GPx y CAT en animales hipertiroideos que se correlacionó con una mayor expresión genómica y proteica. Conclusiones: El hipertiroidismo modula la distribución mineral de cofactores en los OLS, aumentando su concentración en tejido hematopoyético. La expresión de las enzimas GPX y CAT aumentó posiblemente como mecanismo de compensación tendiente a contrarrestar la disminución mineral en los OLS. La FRXT permitió cuantificar con alta sensibilidad los elementos minerales y su aplicación en biomedicina podría ser de gran utilidad para el diagnóstico y/o seguimiento de la eficacia de tratamientos terapéuticos en determinadas patologías.