Preventive and Immunotherapeutic role of purified extract rich in b-glucans derived from Grifola frondosa mushroom (D-Fraction) in a biomodel of breast carcinogenesis

AGUSTINA ROLDAN DE AMICIS; DIEGO AGUILERA BRAICO; BELEN BRIE; BALOGH GABRIELA

buenos aires

Simposio; Simposio Ganando la Guerra contra el Cáncer (MINCYT-RAICES); 2016

La inmunoterapia refiere a la interacción de moléculas farmacológicamente activas con el sistema inmune, a fin de restaurar o intensificar su capacidad natural para detectar y eliminar células anormales pudiendo prevenir muchos tipos de cáncer. Se han descrito diversos polisacáridos micóticos como potentes inmunomoduladores, entre ellos los beta-glucanos derivados del hongo medicinal Grifola frondosa y sus extractos, que activan al sistema inmune promoviendo la producción de citoquinas, o induciendo apoptosis en células tumorales. Hasta el momento hemos demostrado que el extracto purificado Fracción D Maitake PRO4X (Mushrooom Wisdom, N.Y, USA) bloquea el crecimiento y la proliferación de células malignas, activando los mecanismos de muerte celular específicos de células tumorales; es capaz de gobernar la naturaleza metastásica por inducir la sobreexpresión de genes target, inhibiendo el proceso de carcinogénesis mamaria en ratones BALBc, evidenciando así un notable potencial inmunoterápico y de agente preventivo para el desarrollo de cáncer de mama. Sin embargo, sus componentes farmacológicamente activos y mecanismos moleculares de acción no han sido completamente dilucidados. Hallamos que el tratamiento con 5mg/kg de Fracción D de Maitake Pro4X en ratones BALB/c, previene el desarrollo de tumorigénesis mamaria en un 40%, reduce la invasividad tumoral, disminuye significativamente el proceso de angiogénesis y aumenta la sobrevida total de los animales. Por otra parte y utilizando el mismo modelo experimental, comparamos los efectos de Fracción D, con los del tratamiento convencional de quimioterapia empleando Doxorrubicina+Ciclofosfamida para el tratamiento de ratones BALB/c enfermos con tumores de mama. Luego de 5 semanas de administración, observamos que Fracción D aumentó significativamente la sobrevida total de los animales; si bien no redujo el volumen tumoral, dio lugar a tumores bien diferenciados, de contornos definidos, menos proliferativos y con menor número de células, a diferencia del grupo Control. Además, Fracción D redujo la angiogénesis tumoral, evitando metástasis e incrementando la sobrevida total de los animales. En cuanto a la combinación con Quimioterapia, Fracción D disminuyó los efectos tóxicos de ésta, y aumentó la sobrevida total de los animales, reduciendo la malignidad de los tumores mamarios. Comparamos además el potencial preventivo en carcinogénesis mamaria frente al Tamoxifeno. Los resultados confirmaron que Fracción D previene la carcinogénesis mamaria en el 40% de los animales, en comparación con Tamoxifeno que solo la previno en un 25%, mientras que la administración simultánea Tamoxifeno / Fracción D previno la carcinogénesis mamaria en un 80%. Observamos además que la mortalidad de los animales tratados con Tamoxifeno fue del 20%, comparado con el 0% de los grupos Maitake Pro4X, y Tamoxifeno + Fracción D, mientras que en el grupo Control la mortalidad fue del 40%. Estos resultados sugieren que Fracción D presenta un potencial preventivo de carcinogénesis mamaria muy superior al del Tamoxifeno, y con menores efectos adversos, aumentando la sobrevida total relativa de los animales, y mejorando los parámetros bioquímicos y hematológicos. Nuestra hipótesis es que Fracción D quizás actuaría como co-adyuvante en la terapéutica de Tamoxifeno para la recidiva o prevención de la carcinogénesis mamaria en una población de riesgo. Recientemente estudiamos la citotoxicidad de la Fracción D en cultivos de células mamarias humanas normales (línea MCF-10) y tumorales (línea MCF-7). Los resultados demostraron que Fracción D Maitake aumentó significativamente la muerte de células tumorales en comparación con las células normales y el control sin tratar, en los que no se observó efecto alguno a ninguna de las dosis ni los tiempos ensayados. Por último, examinamos la toxicidad aguda de Fracción D en animales, para lo cual se estudió la toxicidad aguda administrando oralmente una única dosis de 2000 mg/kg peso corporal de Fracción D (120 veces superior a la dosis usada empíricamente con fines terapéuticos). Para estudiar la Toxicidad subaguda, administramos una dosis diaria de 5 mg/kg/día oralmente durante 28 días consecutivos empleando 5 ratones machos y 5 hembras divididos en: Grupo Control y Grupo Tratado. Luego de finalizado el tratamiento, los animales fueron sacrificados para evaluar los órganos internos, aspecto macroscópico, y el peso de los mismos. De los experimentos de toxicidad en dosis aguda y sub-aguda pudimos concluir que Fracción D no ha demostrado signos de toxicidad en ninguno de ambos ensayos, con una mortalidad del 0% y un valor de DL50 por encima de los 2000mg/kg peso corporal. Podemos inferir que Fracción D Maitake es un compuesto seguro, no toxico e inocuo para el tratamiento de animales. Cabe destacarse que en Argentina no se han realizado estudios similares empleando compuestos moleculares derivados de hongos medicinales para el tratamiento del cáncer. Sus efectos benéficos podrían aplicarse en la terapéutica de pacientes que se hallen bajo quimio o radioterapia.