BIOMED   24552
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES BIOMEDICAS
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
LA DISMINUCIÓN DE LA ACTIVIDAD DEL CANAL DE CLORURO CFTR DETERMINA UNA DISMINUCIÓN DEL pH EXTRACELUALR EN CULTIVOS CELULARES.
Autor/es:
CANCIO, CARLA E.; CLAUZURE, MARIÁNGELES; MASSIP COPIZ, MARÍA M.; MORI, CONSUELO; ASENSIO, CRISTIAN; VALDIVIESO, ANGEL G.; SANTA COLOMA, TOMÁS A.
Reunión:
Congreso; LIX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2014
Resumen:
(408) LA DISMINUCIÓN DE LA ACTIVIDAD DEL CANAL DE CLORURO CFTR DETERMINA UNA DISMINUCIÓN DEL PH EXTRACELULAR EN CULTIVOS CELULARES Cancio, Carla Estefania; Mori, Consuelo; Clauzure, Mariángeles; Massip Copiz, María Macarena; Asensio, Cristian; Valdivieso, Angel Gabriel; Santa Coloma, Tomás Antonio Laboratorio de Biología Celular y Molecular, Instituto de Investigaciones Biomédicas (BIOMED)-UCA-CONICET La Fibrosis Quística (FQ) es una enfermedad autosómica recesiva causada por mutaciones que afectan la actividad del canal de cloruro CFTR. Además de transportar Cl-, su actividad se ha visto asociada al transporte de bicarbonato, con implicancias en la regulación del pH extracelular. Recientemente reportamos una reducción de la actividad del Complejo I mitocondrial en FQ que está mediada por IL-1beta. La reducción de la respiración celular en FQ podría conducir a un aumento en la producción de lactato que, sumado a la alteración del transporte de bicarbonato, podría profundizar la reducción del pH extracelular. Nuestro objetivo es determinar si la falla del CFTR induce una disminución en el pH extracelular en cultivos celulares y los posibles mecanismos involucrados. Como modelos de FQ se utilizaron células IB3-1 (FQ) y células C38 (IB3-1 con CFTR corregido); y células Caco- 2 (expresan CFTR) transfectadas con un plásmido de ARN de interferencia contra el CFTR (shRNAi, Caco-pRS26) y con un plásmido control (Caco-pRS30003). Se cultivaron 20000 células/ cm2 en medio DMEM/F12 con 5% de suero fetal bovino, se dejaron crecer 3 días y luego fueron incubadas en medio libre de suero a diferentes concentraciones de bicarbonato. Los resultados mostraron una disminución del pH extracelular en células IB3-1 (pH=7,65) respecto a las células C38 (pH=7,94) de 0,29 ± 0,06 puntos (media±SE, n=3) en medio sin HEPES. Resultados similares fueron obtenidos en células IB3-1 (pH=7,02) y C38 (pH=7,31) incubadas en medio con HEPES. Estos resultados se repitieron en células Caco-pRS26 con respecto a las células Caco-pRS30003. Podemos concluir que efectivamente existe una reducción en el pH extracelular en cultivos de modelos celulares FQ. Esta disminución posiblemente esté relacionada con una mayor producción de lactato y una menor secreción de bicarbonato. Agradecimientos: CONICET, PIP-2012-2014-0685 y PICT 2012-1278 de la ANPCYT. Beca Agencia (CEC), beca CONICET (MMMC) y beca UCA (MC).