Análisis del efecto de la mutación E101G en la conformación, estabilidad, dinámica y en la función de la tiorredoxina de E. coli

JAVIER SANTOS; EDUARDO I. HOWARD; ERNESTO A ROMÁN; ALEJANDRA COUSIDO; ANDRE MITSCHLER ; DIEGO VAZQUEZ; JAVIER SANTOS; ALBERTO POSDJARNY

Buenos Aires

Congreso; Sociedad Argentina de Biofísica; 2011

Sociedad Argentina de Biofísica

<!-- @page { margin: 2cm } P { margin-bottom: 0.21cm } --> La tiorredoxina de Escherichia coli (TRX) es una proteína pequeña, de 108 residuos que presenta un plegado de tipo α/β con una topología relativamente compleja. Es altamente soluble, y termodinámicamente estable (para la forma oxidada, C32S-SC35 el GNUH20 8 kcal/mol a 25 °C). Estas características la convierten en un excelente modelo para estudios biofísicos tendientes a comprender las relaciones existentes entre la estabilidad termodinámica, la dinámica del estado nativo, y la función. Aquí presentamos el inicio de una caracterización biofísica completa de la variante TRXE101G. En esta mutante, un residuo de ácido glutámico ubicado en la hélice C-terminal, a más de 19 Å de las cisteínas C32 y C35, que forman parte del sitio activo fue reemplazado por un residuo de glicina con el objetivo de modular la dinámica de este elemento de estructura secundaria. La variante TRXE101G presentó menor estabilidad termodinámica (GNUH20 1 kcal/mol). Sin embargo, se observó un incremento de 1.75 veces en la capacidad de reducir insulina, con respecto a la variante silvestre. Mediante cristalografía y difracción de rayos X, con una resolución de 1.3Å, se pudo inferir la presencia de un estado nativo caracterizado por la coexistencia de múltiples conformaciones. También presentaremos resultados de dinámica por NMR, simulación computacional y algunos aspectos relevantes en cuanto a la reactividad y función redox de esta proteína. Sugerimos que el acoplamiento observado entre sitios distantes podría estar mediado por la dinámica.