DISEÑO RACIONAL DE INHIBIDORES DE LA ARN-POLIMERASA DEL VIRUS DE LA DIARREA VIRAL BOVINA

LEAL, EMILSE S.; BOLLINI, MARIELA; CASAL, JUAN J.; DAMIAN GONZALEZ VALDEZ; ELIANA F. CASTRO; LUCÍA V. CAVALLARO

Potrero de los Funes

Simposio; XXI Simposio Nacional de Química Orgánica; 2017

Sociedad Argentina de Investigación en Química Orgánica

La proteína NS5B de BVDV es una enzima esencial para la replicación viral y se ha determinado que posee actividad de ARN-polimerasa dependiente de ARN (RdRp). La estructura de la polimerasa de BVDV contiene un único dominio N-terminal, además de los dominios finger, palm y thumb que es común a otras polimerasas virales. El objetivo de este trabajo es identificar, sintetizar y ensayar moléculas pequeñas que bloqueen la función de la polimerasa y por ende la replicación viral.A través del software FPOCKET y DoGSiteScorer, se detectaron 4 bolsillos con características "drogables". Con los resultados obtenidos se procedió a realizar cribado virtual (VS) empleando diferentes librerías comerciales de compuestos, así como como una librería propia del laboratorio (300 compuestos) Mediante el empleo de técnicas de acoplamiento molecular, se realizó un estudio de afinidad de las estructuras con la proteína cristalizada (PDB 1S48 y 1S4F). Los complejos con mejor scoring e interacciones favorables fueron seleccionados y reagrupados en clusters considerando sus propiedades lipofílicas y diversidad estructural. Al realizar el VS partiendo de la librería ZINC, se seleccionaron una serie de estructuras con unión favorable a RdRp. Luego de la adquisición y/o síntesis de las mismas, se realizó el ensayo in vitro. De las moléculas ensayadas, un derivado del núcleo de quinazolina, presentó buena actividad anti-BVDV y baja citotoxicidad (CE50: 9.33 μM, CC50: 51.6 μM). Mediante cálculos de dinámica molecular (MD) se estudió la estabilidad y energía del complejo entre el ligando y RdRp a través del tiempo. A partir de los resultados, se plantearon modificaciones estructurales a dicho compuesto para mejorar la capacidad de unirse al bolsillo. Actualmente, se están haciendo ensayos de actividad anti-BVDV de dichos derivados. Se aplicó el mismo protocolo de VS partiendo de la librería Maybridge HitFinder. Los compuestos seleccionados fueron sintetizados y/o adquiridos a sus vendedores y, actualmente, se están haciendo ensayos de actividad anti-BVDV. A partir de estos resultados se podrá refinar el modelo y optimizar los hits encontrados. En conclusión, a partir de la combinación de las técnicas de VS y MD identificamos una serie de compuestos estructuralmente diversos con actividad anti-BVDV. La modificación estructural de los hits permitirá mejorar el perfil farmacodinámico y farmacocinético de los mismos, así como aportar nuevas ideas al desarrollo de antivirales.