Estandarización de una técnica de extracción de ADN a partir de larvas individuales de Culicoides (Diptera: Ceratopogonidae)

GUSTAVO R.; DARDO MARTÍ; AYALA, MAHIA MARIEL

Mendoza

Congreso; X Congreso Argentino de Entomología; 2018

El género Culicoides Latreille, de distribución cosmopolita es el más diverso de la familia Ceratopogonidae e incluye muchas especies que actúan como vectores de enfermedades. Los estados preimaginales se hallan en una amplia variedad de hábitats acuáticos tales como hojarasca, vegetales en descomposición, frutas, estiércol, epífitas, huecos de árboles, entre otros. Las larvas miden entre 2-5 mm de longitud, tienen aspecto vermiforme, su cuerpo es blanco translúcido, presentan una cápsula cefálica de color amarillo a marrón y se desplazan con un movimiento rápido y ondulante característico. A pesar que algunas de las especies presentes en la región poseen sus estados inmaduros descriptos, la identificación taxonómica solo puede realizarse una vez emergido el adulto. El objetivo del trabajo fue estandarizar un protocolo de extracción de ADN a partir de larvas individuales y la posterior amplificación por PCR utilizando cebadores específicos. Para ello, se trabajó con larvas de Culicoides debilipalpis, las cuales fueron recolectadas a partir de huecos de árbol de plantas de mango. Al aplicar distintas combinaciones para la extracción del ADN, se observó que los mejores resultados se obtuvieron con el agregado al Buffer de Lisis de SDS 2%, sacarosa 1M y Proteinasa K para la disrupción celular. La purificación del ADN y remoción de proteínas se realizó por precipitación salina con dos lavados de acetato de sodio y de potasio 4 M, respectivamente. Este método permitió la amplificación de una región de 600 pb correspondiente a una porción del ITS-1 mediante cebadores específicos para el género a una temperatura de hibridación de 58°C. Este método ofrece una aproximación a la identificación de especies mediante la comparación de los tamaños de los productos de amplificación obtenidos para los distintos estados del ciclo de vida de los Culicoides. Además, representa un aporte valioso al estudio de Culicoides en la región.