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Phalloceros caudimaculatus y Phalloceros elachistos comúnmente llamados madrecitas de agua, pertenecen a la familia Poecillidae y a la tribu Cnesterodontinii. Este género de peces neotropicales se encuentra ampliamente distribuido en Brasil, Paraguay, Uruguay y Argentina; comprendiendo veintidós especies reconocidas hasta el momento. El presente trabajo propone realizar una descripción cariotípica de ambas especies colectadas en dos afluentes del río Paraná: arroyos Itá y Antonica. Las preparaciones cromosómicas se obtuvieron mediante técnicas directas a partir de pool de órganos y posterior tinción con Giemsa. Se realizaron técnicas de tinción diferencial con Ag-NOR con el fin de localizar regiones organizadoras nucleolares y de bandeo C para revelar la distribución de la heterocromatina. Para ello, se colectaron 18 ejemplares de P. caudimaculatus (15 hembras y 3 machos) y 10 ejemplares de P. elachistos (hembras). Ambas especies presentaron un complemento cariotípico de 46 cromosomas acrocéntricos (NF=46), cuyos tamaños mostraron una serie continua decreciente. La tinción con Ag reveló la ubicación de las NORs en los brazos cortos de al menos un par de acrocéntricos de tamaño pequeño y un par acrocéntrico de tamaño grande en la especie Phalloceros caudimaculatus; mientras que para Phalloceros elachistos se observó la presencia de NORs en los brazos cortos de un par acrocéntrico pequeño y en el extremo terminal de los brazos largos de un par acrocéntrico mediano. El bandeo C reveló bloques de heterocromatina en las regiones pericentroméricas de casi todos los cromosomas presentes en ambas especies. Los resultados obtenidos para P. caudimaculatus coinciden con trabajos previos citados en la literatura, mientras que otros autores han reportaron un 2n=48. En tanto para P. elachistos, constituye el primer abordaje de la caracterización cariotípica de esta especie para la cuenca del río Paraná.