Detección de altos niveles de persistores en aislamientos de Burkholderia contaminans provenientes de pacientes con fibrosis quística con infección pulmonar crónica

C. PRIETO,; M. J. PALAU,; B. LEÓN,; C. FIGOLI,; P. MARTINA,; C. VESCINA,; F. VIGNOLES,; O. YANTORNO,; M. LEGUIZAMON,; M. BETTIOL,; P. MONTANARO,; D. CASCO,; A. BOSCH.

Rosario, SANTA FE

Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiologia; 2016

Asociacion Argentina de Microbiologia y Asoc Latinoamericana de Microbiologia

Entrelas especies del complejo Burkholderiacepacia (CBc), B. contaminansrepresenta la especie de  mayor prevalencia en pacientes con fibrosisquística (FQ) en Argentina. Aunque para algunos pacientes la infección deltracto respiratorio con B. contaminanses transitoria, su adquisición resulta más típicamente en una infección crónicacon una disminución gradual de la función pulmonar. Recientemente fue reportadoque en B. cenocepacia J2315(perteneciente al linaje ET12), la región genómica del "Marcador epidémicode cepa Burkholderia cepacia"(BCESM) que se encuentra en la isla genómica BcenGI11 (GI), contiene un operón(BCAM0257-8), que estaría involucrado en la persistencia, la expresión dequórum sensing y la virulencia y su regulador (BCAM0259).El objetivo de este trabajo fue estudiar la posible relación entre lasurgimiento de persistores, el establecimiento de la infección crónica por B. contaminans y la presencia de losgenes asociados a la isla genómica BcenGI11, los cuales no fueros reportadospara esta especie, hasta el momento. Paraeste propósito, se analizaron 145 aislamientos de B. contaminans recuperados de muestras de esputo de 51 pacientesatendidos en el período de 2004-2015 en 3 centros de referencia FQ enArgentina. Se determinó la concentración mínima inhibitoria (CIM) pormicrodilución en caldo EUCAST utilizando placas de microtitulación  de 96pocillos empleando ciprofloxacina entre  0,25 a 1024 µg/ ml. La MIC sedefinió como la concentración más baja para la que no hay diferenciasignificativa en la DO (λ = 590 nm) entre los pocillos inoculados y elblanco  después de 24 hs de incubación. Se cuantificaron las célulaspersistoras recuperadas de cultivos de biofilms de 24 hs expuestos a concentracionesde ciprofloxacina de 2 a 128xMIC por 24 hs. Las regiones genómicas del BCESM yBCAM0257-8-9 fueron amplificadas por PCR y secuenciadas utilizando primersespecíficos de B. cenocepacia ysecuenciados. Se compararon las secuencias obtenidas con las secuenciashomólogas de la cepa epidémica B.cenocepacia ET12 empleando BLAST. Elporcentaje de persistores fue entre 5 y 10% para aislamientos de B. contaminans recuperados deinfecciones pulmonares crónicas en contraste con menos del 2% de persistores enaislados obtenidos de infecciones transitorias. Curiosamente, el 100% de lospacientes crónicos infectados (37 pacientes) y el 28,6% de los pacientes coninfecciones transitorias (4 de cada 14 pacientes) albergaban tanto las regionesdel BCESM y BCAM0257-8-9. El análisis de secuencia mostró que los productos deamplificación de estas regiones tenían una identidad de 93 y 95% con lassecuencias de B. cenocepacia J2315,respectivamente. Estos resultados mostraron que la presencia del operóncontenida en la región BCESM podría ser responsable del surgimiento depersistores y por lo tanto de las dificultades en las erradicación de lainfección crónica por B. contaminans.