Aislamiento e identificación de hongos entomopatógenos que afectan a gusanos de seda (Bombix mori L.) en la provincia de Misiones

LOPEZ SILVIA; WALANTUS, LEONARDO HORACIO; JERKE GLADIS; AYALA, MAHIA

Posadas, Misiones

Congreso; IX Congreso Argentino de Entomología; 2015

Centro de Investigaciones Entomológicas y Universidad Nacional de Misiones

La sericicultura se presenta como una alternativa productiva para la provincia de Misiones. Desde el Centro de Investigaciones Entomológicas- Parque Tecnológico Misiones (CIE-PTMi) se desarrolla el Programa de Selección y Mejoramiento Genético de gusanos de seda (Bombyx mori L.), cuyo principal objetivo es llegar a producir huevos híbridos F1 que produzcan capullos de primera calidad. Si bien en los manuales o guías prácticas de cría de gusanos de seda se detallan las enfermedades posibles que pueden contraer las larvas de B. mori y cuáles son sus agentes causales, son pocos los trabajos científicos, con referencia a las especies de hongos patógenos que provocan muscardina en Argentina. La ausencia de reproducción sexual elimina la posibilidad de analizar los criterios de interfecundidad, de allí que la taxonomía de estos hongos esta esencialmente definida por criterios morfológicos y de desarrollo, la cual es a veces insuficiente para apreciar la variabilidad genética interespecífica. Las regiones de los espaciadores de transcripción interna (ITS) han sido ampliamente utilizadas en la sistemática de hongos. El objetivo de este trabajo fue aislar e identificar morfológica y molecularmente cepas locales de hongos entomopatógenos que provocan muscardina en B. mori L. Para este trabajo se recolectaron 50 larvas de gusanos de seda infectados, de una cría realizada en la zona donde se encuentra el arco limítrofe de la ciudad de Posadas con la provincia de Corrientes y otra realizada en la Planta Piloto de Sericicultura, CIE-PTMi. La recolección de larvas se produjo en los meses mayo/noviembre de 2011 y abril/mayo/diciembre de 2012, en donde la temperatura media de 25-30°C, favoreció el desarrollo de estos hongos y de las especies identificadas, el mayor porcentaje (68%) provino del hongo Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. El aislamiento de las cepas se realizó por siembra directa a partir de insectos infectados en medio de cultivo selectivo SDAY y SMYA (modificado de Samson 1981). Para la identificación molecular la metodología consistió en la extracción de ADN a partir de micelio fúngico utilizando el protocolo propuesto por Fonseca (2012) y la amplificación y secuenciamiento de región ITS1- 5,8S-ITS2 (aproximadamente 600 pb.) utilizando cebadores universales ITS 1 e ITS 4. Las secuencias nucleotídicas fueron lineadas con el programa ClustalW del paquete MEGA 6. Posteriormente para una mejor visualización, se representó cada análisis, bajo un árbol filogenético por el método estadístico Máximum Parsimony. Los resultados corresponden a la identificación de las especies B. bassiana (Familia Cordycipitaceae; Orden Hypocreales) y Aspergillus versicolor (Vuil) Tirab. (Familia Trichocomaceae; Orden Eurotiales). Se concluye que fue posible optimizar un método eficaz, rápido y sencillo de aislamiento ?in vitro? para hongos entomopatógenos. Mediante la utilización de medios de cultivos selectivos y el antibiótico cloranfenicol se consiguió el aislamiento de 50 hongos nativos de la provincia de Misiones. Los genes nucleares (ITS1-5,8S-ITS2) son una excelente herramienta para confirmar la identificación de los aislamientos fúngicos. A través del análisis filogenético, se identificó de forma correcta y completa a los dos aislamientos como: B. bassiana Bb Ai y A. versicolor As Ad.