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El género neotropical Phyllomedusa, comprende un grupo de anuros perteneciente a la familia Hylidae (Subfamilia Phyllomedusinae), con 31 especies agrupadas en su mayoría en cuatro grupos de especies (grupos P. burmeisteri, P. hypochondrialis, P. perinesos y P. tarsius). Cerca del 50% de los taxones de Phyllomedusa poseen datos sobre su constitución cariológica, con el número básico (x) de 13 cromosomas presente en todas las especies estudiadas. Para Phyllomedusa, se ha descripto una especie tetraploide (P. tetraploidea) y un elevado polimorfismo en la localización de las regiones organizadoras nucleolares (NORs).El objetivo del presente trabajo es describir la constitución cariotípica en nueve especies de Phyllomedusa: P. iheringii, P. tetraploidea (grupo P. burmeisteri); P. boliviana, P. sauvagii (grupo P. tarsius); P. hypochondrialis, P. azurea, P. megacephala (grupo P. hypochondrialis); P. tomopterna (grupo P. perinesos) y P. vaillantii (no asignada a grupo), en base a ejemplares provenientes de Argentina, Uruguay, Brasil y Ecuador. Las preparaciones cromosómicas obtenidas a partir de médula ósea y epitelio intestinal, fueron sometidas a coloración con Giemsa, impregnación argéntica para la detección de las NORs y bandeo C para la caracterización de la heterocromatina. Los cariotipos fueron ordenados de manera decreciente de tamaño, en función de la posición del centrómero. Todas las especies analizadas presentan un cariotipo similar con 2n=2x=26 (NF=52), a excepción de Phyllomedusa tetraploidea, (2n=4x=52; NF=104). No se evidenciaron cromosomas sexuales heteromórficos. Las NORs se localizan preferentemente sobre el par 9 (con algunas excepciones en el par 7), evidenciándose además NORs múltiples en P.tetraploidea (1p y 9p) y P. azurea (8p y 10p). En las especies analizadas las bandas C+ sedistribuyen mayoritariamente en la región centromérica de todo el complemento cromosómico.El x=13 es compartido por Phyllomedusinae, múltiples taxones de Pelodryadinae (grupo hermano), así como por varios otros linajes de Leptodactyliformes y representa por tanto un estado plesiomórfico. La variabilidad en las NORs de Phyllomedusa indica múltiples reordenamientos cromosómicos a lo largo de la evolución cariotípica del grupo. La caracterización de las especies por medio de técnicas más resolutivas de hibridación in situ permitirá dilucidar los cambios cromosómicos que han ocurrido a lo largo de la evolución de este particular grupo de anuros.