Nuevas tecnologías de micromanipulación en especies domésticas

SALAMONE D; BEVACQUA RJ; GAMBINI A; CANEL N; HIRIART MI; MORO L; BUEMO C; GIBBONS A

CAPITAL FEDERAL

Congreso; Segundo Congreso Internacional de la Sociedad Argentina de Tecnologias Embrionarias; 2014

Sociedad Argentina de Tecnologias Embrionarias

Esta revisión describirá numerosos trabajos de micromanipulación en diferentes mamíferos de gametas y embriones realizados en nuestro laboratorio. Un de ellas es clonación por trasplante nuclear (NT) a partir de fetos o animales adultos. Usualmente la efectuábamos mediante tres métodos diferentes, uno de ellos involucra la enucleación de los oocitos con la zona pelúcida (ZP), el otro libre ZP, en ambos casos seguida de la fusión de la célula donante. El tercer método implica la enucleación con ZP y la inyección de la célula somática. Se evaluó protocolos de activación química que utilizan una nueva droga aislada en la argentina la Dehidroleucodina. La utilización de embriones libre de zona pelúcida nos permitió la agregación embrionaria y por lo tanto generar crías clonados provenientes de más de una célula donante. Los métodos fueron utilizados de manera eficiente para generar blastocistos en el ganado vacuno, ovejas, cabras, caballos, cerdos y felinos, generándose nacimientos en equinos. Realizamos experimentos de ICSI produciendo embriones transgénicos en cinco especies domésticas con la proteína fluorescente verde (GFP). También se analizaron nuevas estrategias para producir embriones transgénicos que expresen GFP basadas en la inyección citoplasmática de ooplasto expuesto al transgen, o fromando complejos con liposomas en embriones de FIV logrado altas tasas de expresión del transgén. Utilizamos estos métodos para marcar el embrión con GFP (embriones verdes) y crear nuevas técnicas de micromanipulación. Una de ellas consintió la clonación embrionaria de embriones que expresan GFP, seguido por el uso de las blastómeras para la clonación de embriones. También se multiplicamos embriones verdes por la separación de células del embrión de 8 blastómeros verdes, seguido de la agregación con dos tetraploide/asíncrono. En otra serie de experimentos se demostró que el espermatozoide puede clonarse de manera eficiente; este método permite la determinación del sexo en una copia antes de fertilizar ovocitos con los demás.También fue posible clonar los ovocitos seguida de la reconstrucción de embriones bovinos. Ambas técnicas tienen un enorme potencial para seleccionar genomas específicos. También hemos desarrollado recientemente una nueva técnica para transferir y multiplicar bajo número de cromosomas por transplante de micronúcleos. Todas estas técnicas tienen un gran potencial para ser utilizado en la producción animal que será analizada en esta revisión.