HLB: ANÁLISIS DEL GEN 3-HIDROXI-3-METILGLUTARIL CoA SINTASA EN DIAPHORINA CITRI

MACSEMCHUK N.A.; BLARIZA M.J.; LITWIÑIUK S.L.; MIRETTI M.

Simposio; 6º Simposio de Procesos Biotecnológicos (SAPROBIO); 2021

La enfermedad de Huanglongbing (HLB) es causada por la bacteria Candidatus liberibacter ssp., agente transmitido por el psílido Diaphorina citri (Hemíptera: Psyllidae) en América. D. citri es considerada como la plaga más destructiva y consecuentemente la más importante de todas las plagas de cítricos. Posee hábito fitófago y la gama de huéspedes está restringida a cítricos y especies de Rutáceas. La transmisión de la enfermedad se lleva a cabo cuando el psílido se alimenta de la savia de las plantas hospederas y es en ese momento cuando estos insectos adquieren el patógeno, si al alimentarse lo hacen de plantas infectadas. En Argentina, el HLB fue detectado por primera vez en el año 2012 en la Provincia de Misiones y donde además se encuentra presente el insecto vector. Hasta el momento la enfermedad no tiene cura, por lo que las plantas afectadas deben erradicarse y destruirse. Entre las medidas actualmente utilizadas, se destaca el control químico del vector mediante aplicaciones de insecticidas. A efectos de aportar bases que podrían orientar en el futuro el desarrollo de nuevas estrategias de control se analizó el gen 3-hidroxi-3-metilglutaril CoA sintasa (HMG-CoAS). Este gen, codifica para una enzima involucrada en la regulación de síntesis de precursores isoprenoides, entre ellos, la Hormona Juvenil (JH) clave en el desarrollo y reproducción en insectos. Con este propósito, se extrajo RNA total de hembras y machos adultos de D.citri, se procedió a su cuantificación y posterior síntesis de cDNA. Se diseñaron primers específicos. Posteriores amplificaciones y secuenciación de fragmentos de ADNc del gen permitieron amplificar tanto en hembras como en machos adultos un fragmento de 508 pares de bases (pb) con un marco abierto de lectura (ORF) de 186 nucleótidos que codifican para 62 aminoácidos. Utilizando información disponible en el National Center for Biotechnology Information (NCBI) se realizaron alineamientos múltiples de las secuencias nucleotídicas de D. citri con otras especies de insectos, donde se evidenciaron regiones conservadas. Por otra parte, el análisis comparativo de las secuencias de aminoácidos deducidos a partir de las secuencias nucleotídicas de ADNc de D citri reveló un porcentaje de aminoácidos idénticos del 57% con Aedes aegypti, 59% con Blatella germanica y un 53% con Ips pini. También se logró identificar 12 residuos de Serina, 6 residuos de Treonina y 4 residuos de Tirosina que representan potenciales sitios de fosforilación. La relación evolutiva entre taxones señaló que D. citri y B. germánica derivan de un antecesor común, en cambio A. aegypti e I. pini derivan de otro antecesor. D. citri y B. germanica han divergido antes en el pasado evolutivo que A. aegypti e I. pini. Este estudio pretende hallar genes blanco prometedores y eficaces para futuras estrategias de control que permitan reducir eficientemente el impacto que la enfermedad produce en la región.