Optimización de la técnica de citometría de flujo para el estudio de procariotas heterótrofos en lagunas turbias hipertróficas

QUIROGA, M. V.; UNREIN, F.

Congreso; Congreso Argentino de Limnologia (CAL 2016); 2016

Los primeros estudios de microorganismos planctónicos mediante citometría de flujo se realizaron en muestras de aguas oceánicas, y consecuentemente los protocolos de trabajo se han estandarizado en base a las características del ambiente marino y sus comunidades microbianas. A diferencia de los océanos, ciertos cuerpos de agua continentales someros (i.e. lagunas) presentan condiciones hipertróficas y elevados valores de turbidez. La turbidez está determinada por partículas orgánicas e inorgánicas en suspensión, que son detectadas por el citómetro. En lagunas altamente turbias se observa una interferencia en los citogramas que impide la correcta visualización de los procariotas heterótrofos y su cuantificación utilizando protocolos estandarizados. Para optimizar esta técnica hemos comparando diferentes condiciones de fijación y procesamiento de las muestras: a- cuatro fijadores/criopreservantes diferentes (glutaraldehído 1%, paraformaldehído1%+glutaraldehído0.05%, formaldehido tamponado 1% y glicerol+buffer TE 1%), b- distintas concentración del colorante SybrGreen I (10-5, 10-4 y 10-3 respecto del stock comercial) y c- diluciones seriadas de la muestra con buffer PBS (sin diluir, 1:10, 1:100, 1:200 y 1:400). Todas las muestras fueron fijadas, congeladas con nitrógeno líquido y conservadas a -80ºC. Las condiciones optimas observadas para la cuantificación por citometría fueron criopreservación de la muestra con glicerol+TE, dilución de la muestra 1:200 con buffer PBS y concentración final de tinción 10-4 respecto del stock comercial de SybrGreen I.