INBIOTEC   24408
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES EN BIODIVERSIDAD Y BIOTECNOLOGIA
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Identificación de virus de la familia Iridoviridae aislado de Culex eduardoi en criaderos naturales de Mar del Plata
Autor/es:
LOPEZ RP; BERÓN CM; DÍAZ NIETO LM
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Jornada; X Jornadas Regionales sobre Mosquitos.; 2016
Resumen:
Los virus patógenos de culícidos resultan de gran interés como potenciales agentes de control biológico para el manejo de poblaciones de mosquitos de importancia sanitaria. En particular los virus de la familia Iridoviridae ejercen un efecto bioregulador ya que presentan toxicidad en estos hospedadores. Los iridovirus descriptos hasta el momento pueden tener efectos letales, causados por infecciones aparentes, donde las larvas presentan una coloración turquesa. Por otro lado, en las infecciones encubiertas caracterizadas por la ausencia de color, se presentan efectos subletales en el insecto. En criaderos de la ciudad de Mar del Plata nuestro grupo colectó mosquitos en estados de larvas, pupas y adultos que mostraban signos de infección por iridovirus. Los ejemplares colectados fueron identificados como Culex eduardoi de acuerdo a sus caracteres morfológicos. Con la finalidad de identificar molecularmente los virus presentes en los insectos colectados se realizó la extracción del DNA viral utilizando diferentes metodologías. Posteriormente, se emplearon cebadores DNA viral utilizando diferentes metodologías. Posteriormente, se emplearon cebadores específicos para la amplificación de secuencias correspondientes a genes virales. La secuencia nucleotídica obtenida fue analizada por medio de alineamientos múltiples a través del programa BLAST (NCBI). El análisis de la secuencia permitió determinar una identidad del 93% con secuencias de iridovirus de invertebrados. Por otro lado, se realizó la determinación de las proteínas virales mediante electroforesis en geles de poliacrilamida en condiciones desnaturalizantes (SDS-PAGE). Los péptidos obtenidos fueron analizados por nanoHPLC (PAGE) acoplado a un espectrómetro de masa con tecnología Orbitrap. Los resultados obtenidos mediante está técnica fueron analizados en la base de datos BLASTp, las secuencias peptídicas obtenidas mostraron una identidad del 100% con el virus iridiscente de Armadilium vulgare y 86% con una proteína hipotética de Lymphocystivirus del pez Paralichthys olivaceus. Además, se determinó la capacidad de estos virus de infectar larvas de Culex pipiens y se evaluó la transmisión horizontal de los mismos mediante ensayos preliminares de infección por ingestión de un macerado de larvas infectadas. Mediante esta metodología, se observaron signos de infección aparente con iridiscencia en los cuerpos grasos de las larvas analizadas. En los mismos ensayos se observó entre un 70 a un 100% de mortalidad de larvas no coloreadas, posiblemente debido a infección encubierta, ya que en el control realizado bajo condiciones similares no se detectó mortalidad. Estos ensayos fueron repetidos tres veces. En este trabajo se reporta por primera vez la presencia de iridovirus en Cx. eduardoi presentes en criaderos naturales de mosquitos en la ciudad de Mar del Plata, siendo el primer registro en Argentina para esta especie de mosquito. Por otro lado, se confirmó la transmisión horizontal del virus estudiado en larvas de cría de Cx. pipiens en condiciones de laboratorio. Los resultados obtenidos mediante la identificación preliminar de secuencias nucleotídicas y mediante nanoHPLC, sumado a los efectos de mortalidad sobre larvas de Cx. pipiens, indicarían que se trataría de un Iridovirus no descripto previamente.