GENES COI Y 18S RNAr COMO HERRAMIENTAS EN LA IDENTIFICACIÓN DE MOSQUITOS

DÍAZ NIETO LM; BERÓN CM

Resistencia

Jornada; IX JORNADAS REGIONALES DE MOSQUITOS; 2014

La correcta identificación de Culícidos es una etapa crítica en la vigilancia y monitoreo de los mismos. Su identificación por medio de taxonomía clásica, basada en la observación de caracteres morfológicos, es la más aceptada y más utilizada al momento de determinar o clasificar una especie, sin embargo a menudo suele ser dificultosa y limitada a larvas del cuarto estadio y hembras adultas. En algunos casos, se puede realizar también la identificación de machos por medio de su genitalia, pero esta metodología no fue descripta para todas las especies conocidas de mosquitos. Como alternativas para la identificación de especies de distintos insectos, desde hace algunos años se utilizan metodologías químicas y moleculares. Entre ellas, los sistemas de identificación basados en análisis de secuencias nucleotídicas del ácido desoxirribonucleico (DNA) son uno de los más conocidos y extensamente aplicados. El análisis de la variación de la secuencia en la región 5´ del gen mitocondrial citocromo c oxidasa I, COI (?DNA barcoding? o código de barras genético), ha sido propuesto como un método eficaz para la identificación de especies animales. En cuanto a mosquitos, el uso de secuencias de este gen ha sido efectivo para discriminar algunas especies. Por otro lado, las secuencias obtenidas a partir de la subunidad ribosomal pequeña del gen 18S RNAr han sido usadas exitosamente para examinar relaciones evolutivas entre especies, géneros y niveles taxonómicos superiores de diferentes insectos. Las secuencias de este gen son utilizadas con más frecuencia para realizar estudios filogenéticos, pero en particular, para evaluar las relaciones filogenéticas entre especies de mosquitos, han tenido algunas limitaciones. En este trabajo se evalúa y discute la utilidad de estas herramientas moleculares para la identificación de especies de mosquitos de Argentina. En primer lugar, se realizó la identificación morfológica de mosquitos colectados en la ciudad de Mar del Plata y alrededores, usando claves taxonómicas para tal fin. Posteriormente, mediante la amplificación y secuenciación de los genes COI y 18S RNAr de las especies previamente identificadas, y el uso de secuencias adicionales de dichos genes de mosquitos foráneos presentes en las bases de datos públicas del National Center for Biotechnology Information (NCBI), se generaron diversos árboles filogenéticos (Máxima Verosimilitud, Máxima Parsimonia y Distancia). Finalmente, las filogenias obtenidas fueron comparadas con la clasificación morfológica de estos mosquitos. Como resultado de este trabajo se obtuvieron y publicaron en las bases de datos públicas las primeras secuencias correspondientes a los genes COI y 18S RNAr de especies de mosquitos de Argentina. El análisis de los alineamientos generados a partir de las secuencias 18S DNAr, nos permitió agrupar las especies de mosquitos dentro de clados correspondientes al género que pertenecía cada una, pero a nivel específico no se observaron agrupaciones coherentes de algunas especies de acuerdo con la clasificación tradicional. Los árboles generados en base a las secuencias COI demostraron algunas inconsistencias con la clasificación estándar de mosquitos, aunque fueron útiles en algunos casos para posicionar algunas especies en su filogenia. Las filogenias obtenidas por los genes COI y 18S RNAr fueron consistentes a nivel genérico, sin embargo a nivel específico se observaron inconsistencias, ya que en los diferentes árboles generados por las secuencias de los dos genes utilizados, las especies se agruparon de manera diferente. Algunas de estas inconsistencias también se ven reflejadas en la taxonomía clásica al momento de determinar ciertas especies, principalmente las pertenecientes al complejo Culex pipiens. Para obtener resultados más precisos en la taxonomía de especies de mosquitos se deberá utilizar una mayor variedad de genes tales como las regiones intergénicas (ITS), el locus 2 de la acetilcolinesterasa (ace-2), entre otros. A partir de este trabajo se generaron las primeras secuencias COI y 18S DNAr de especies de mosquitos de Argentina, las cuales servirán como base para generar nuevas secuencias de otras especies de mosquitos nativos y permitirán realizar posteriores estudios taxonómicos de mosquitos basados en estas técnicas.