Protocolo de suelo para la extracción de ADN de esporas de hongos micorrícicos en inóculos nativos de la provincia de Buenos Aires

THOUGNON ISLAS, ANDREA J.; COVACEVICH, FERNANDA; SAINZ ROZAS, HERNÁN R.; EYHERABIDE, MERCEDES; ECHEVERRÍA, HERNÁN E.

Rio Cuarto, Cordoba

Congreso; Tercer Congreso Nacional de Ecología y Biología de Suelos, CONEBIOS III; 2013

Tercer Congreso Nacional de Ecología y Biología de Suelos, CONEBIOS III

Los objetivos del trabajo fueron: 1) evaluar la eficiencia micorrícica de la inoculación con hongos micorrícico arbusculares (HMA) nativos de un sitio prístino y de un sitio bajo manejo agrícola de la provincia de Buenos Aires; 2) establecer un protocolo de extracción de ADN de esporas de HMA de los inóculos evaluados a partir de un kit comercial de extracción de ADN de suelo. A partir de muestras de suelo provenientes de 7 localidades de la provincia de Buenos Aires y dos manejos contrastantes (agrícola y prístino) se seleccionaron los inóculos provenientes de la localidad de Lobería (Agrícola, L-A y Prístino, L-P), obtenidos en suelos con elevado contenido de P, Fe y materia orgánica y que habían evidenciado en estudios anteriores elevada capacidad micotrófica y densidad de esporas. Se realizó un ensayo destinado a evaluar la eficiencia micorrícica de los inóculos en cámara de crecimiento. Se inocularon semillas de maíz y tomate con suelo-inóculo con HMA y las poblaciones microbianas nativas asociadas, provenientes de L-A y L-P. Aunque los incrementos en producción de materia seca fueron no significativos (P< 0,05), se registraron respuestas micorrícicas superiores al 40% para tomate y al 25% para maíz, particularmente por la inoculación con L-A. Si bien los incrementos de crecimiento fueron bajos, éstos serían consecuencia de la aun incipiente micorrización. En tal sentido, la mayor colonización micorrícica se registró en maíz inoculado con L-A (16,4%) mientras que con L-P se obtuvo un 8,2%. Para tomate inoculado con L-A la colonización micorrícica fue de 10,5% y de 3,4% cuando fue inoculado con L-P. Por otra parte, a partir de esporas extraídas de los inóculos L-A y L-P, se realizó la extracción de ADN incorporando una modificación al protocolo establecido por el fabricante del kit ZR Soil Microbe DNA MiniPrepTM. Las esporas fueron maceradas utilizando un micropistilo estéril en el primer buffer de extracción del protocolo, posteriormente se continuó con el procedimiento indicado por el fabricante. El ADN extraído se utilizó como templado en reacciones de PCR destinadas a amplificar parte de la región ribosomal 28S ADNr de Hongos. Posteriormente el amplificado fue utilizado como molde para amplificar parte de la región 28S ADNr de representantes del género Glomus. En ambos casos se obtuvieron amplificaciones positivas y con amplicones del tamaño esperado, lo que se considera un indicativo del éxito de la modificación del protocolo de extracción de ADN. La modificación propuesta podría ser de gran utilidad para aumentar la representatividad ambiental en estudios destinados a determinar la variabilidad genética de los HMA. El próximo paso será poner a punto las reacciones de PCR para aumentar su especificidad y metodologías de análisis de la variabilidad genética de los HMA de los inóculos.