Incorporación de la Pi a la Na+, K+-ATPasa durante la hidrólisis de ATP en ausencia de K+

BECERRA, A., PEZZA, R. Y CAMPOS, M.

La Plata

Congreso; ´XXVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 1998

Sociedad Argentina de Biofísica

Este trabajo continúa estudios sobre la reactividad de la Na+,K+-ATPasa cuando actúa como Na+-ATPasa. En estas condiciones incorpora fosfato inorgánico (Pi) a la forma E2;esto es inhibido por Na+ exterior y por ATP actuando en el sitio regulatorio (Campos y Beaugé, J. Biol. Chem. 269, 18028-18036, 1994). Se investigó el efecto de Na+, Pi y vanadato (V) sobre la incorporación de Pi y la reactividad de esa fosfoenzima a iones K+. A [Na+] por encima de 10 mM la reducción en la incorporación de Pi se acompañó de un incremento en la .hidrólisis de ATP; esto descarta la existencia de una reversión en el ciclo de reacción. Por debajo de 10 mM [Na+] la inhibición por Na+ con afinidad intermedia de la actividad Na+-ATPasa y de la hidrólisis de E2P coincidió con una inhibición del 50% de la incorporación de Pi. Se ha sugerido (Fedovova et al, N. Y.A.Sc. 834, 389-389, 1997) que el complejo E2P formado por Pi y ATP son diferentes. En nuestro caso, cuando este complejo se forma durante le actividad Na+-ATPasa, la hidrólisis espontánea y la hidrólisis estimulada por K+ son indistinguibles en los complejos formados a partir de [23P]Pi y de [32P]ATP. Estos resultados indican: (1) Durante la actividad Na+-ATPasa, Na+ exterior antagoniza la incorporación directa de [32P]Pi por dos mecanismos: (i) disminución de la ruptura de E2P por debajo de 10 mM, Y (ii) la formación del complejo E2Na2 refractario Pi, por encima de 10 mM. (2) En lo que respecta a V, los efectos de ATP y Na+ fueron diferentes a los observados con Pi, sugiriendo que el antagonismo Na+-V requiere otros mecanismos aparte de la formación del complejo E2Na2. (3) La reactividad de E2P formado durante la actividad Na+-ATPasa es independiente de la vía de formación (fosforilación anterógrada o retrógrada).