EXPRESIÓN DE UN ANTÍGENO DE SUPERFICIE (MSA-2C) DE BABESIA BOVIS EN EL CILIADO TETRAHYMENA THERMOPHILA COMO POSIBLE CANDIDATO VACUNAL CONTRA LA BABESIOSIS BOVINA

JOSEFINA CAILLAVA; RODRIGUEZ ANABEL; M. L. TOMAZIC; CHRISTENSEN MONICA; LEONHARD SCHNITTGER; A. D. NUSBLAT; B.C. NUDEL

Buenos Aires

Congreso; XIII Congreso Argentino de Microbiología; 2013

Asociacion Argentina de Microbiologia

La babesiosis bovina es una enfermedad producida por parásitos protozoarios intraeritrociticos pertenecientes al género Babesia sp. Es endémica en el norte de Argentina y representa uno de los problemas sanitarios más importantes en dichas zonas debido a las pérdidas económicas que genera en la producción bovina. El método usado en nuestro país para evitar brotes es la vacunación con parásitos vivos atenuados, con los inconvenientes que pueden preverse en cuanto a dificultad y peligrosidad en su elaboración, estabilidad y conservación. La proteína MSA-2c de Babesia bovis pertenece a la familia de antígenos variables de la superficie del merozoito (VMSA) y está unida a la membrana celular mediante un ancla de glicosilfosfatidilinositol (GPI). Los miembros de esta familia se consideran candidatos vacunales por ser inmunodominantes en animales infectados y tener epitopes B neutralizables, y particularmente a MSA-2c como un promisorio candidato vacunal por ser el miembro más conservado entre diferentes aislamientos geográficos del microorganismo. Babesia bovis pertenece al filo apicomplexa junto a los ciliados y dinoflagelados. La cercana filogenia con el ciliado Tetrahymena thermophila ha posibilitado que varias proteínas con anclas GPI de patógenos pertenecientes al filo apicomplexa, sean expresadas eficientemente en el ciliado. Se propuso expresar el antígeno de superficie MSA-2c de B. bovis en T. thermophila para la posterior evaluación de su inmunogeneicidad y posible empleo en la formulación de una vacuna contra la babesiosis que confiera inmunidad protectora al ganado vacuno. Se obtuvo el fragmento de DNA correspondiente a la proteína MSA-2c a partir del genoma de B.bovis mediante PCR con primers específicos, se insertó en un vector de clonado (sistema Gateway) y posteriormente en un vector de expresión de T. thermophila (pBS-ICY). Este último es integrativo y se inserta en el genoma de T. thermophila por recombinación sitio específica en el locus rpL29 (codifica para la proteína ribosomal L29), confiriendo resistencia a cicloheximida en los alelos mutados. La transformación optimizada se realizó por biolística (bombardeo de células con partículas de oro, recubiertas de DNA) y se seleccionaron las transformantes por su resistencia a cicloheximida (12,5 μg/mL). Se aislaron clones y se chequeó la presencia del gen MSA-2c en el DNA genómico de T. thermophila mediante PCR con primers específicos. Posteriormente, se evaluó la transcripción del gen MSA-2c, mediante la técnica de RT-PCR. Como resultado se observo la transcripción del gen solamente en los cultivos en los cuales se realizo la inducción con cadmio (inductor del promotor usado). Estos resultados preliminares muestran que en el ciliado Tetrahymena es posible transcribir eficientemente un gen heterólogo del apicomplexa Babesia bovis Actualmente se están realizando ensayos para evaluar la expresión proteica como también su localización en membranas para su posterior ensayo inmunogénico.