El uso del protozoario Tetrahymena thermophila en la enseñanza universitaria

MARIA BELEN DE LUCA; MONTES, GUADALUPE; MARIA LUZ SANCHEZ; CID NICOLAS; EUGENIA ELGUERO; CAROLINA CHAIN; CLARA B. NUDEL; RODRIGO H GONZÁLEZ; A. D. NUSBLAT

CABA

Congreso; XXVII Reunión Anual; 2015

Sociedad Argentina de Protozoologia

En este trabajo se presentan los resultados preliminares sobre el uso del protozoario Tetrahymena thermophila, organismo modelo eucariota, en la enseñanza universitaria. La asignatura "Diseño y optimización de sistemas biológicos", electiva para estudiantes de la carrera de Bioquímica en la Facultad de Farmacia y Bioquímica - Universidad de Buenos Aires, tiene como principales objetivos: Introducir al alumno en el aislamiento y selección de microorganismos de interés industrial; adquirir conocimientos en sistemas de mejora genética para clonado y expresión; en el estudio de los procesos para la producción de alimentos, medicamentos y biocombustibles, como también busca introducir al alumno en la Biología Sintética y biotransformación de interés industrial.En el trabajo práctico del curso se estudió el metabolismo de esteroles, concretamente  la conversión de colesterol a pro-vitamina D3. Para ello se utilizó al ciliado Tetrahymena thermophila como ejemplo de sistema biológico para la biotransformación de los metabolitos de interés industrial. A partir de una cepa salvaje de Tetrahymena, se analizó la conversión de colesterol a pro-vitamina D3. Como sistema de cultivo se utilizó batch en fermentador, de esta manera se pudo controlar el pH, la temperatura, la oxigenación y la agitación. Los alumnos monitorearon y controlaron el cultivo del ciliado a distancia mediante: escritorio remoto de Windows para PC y IOS.  Con la finalidad de modificar la vía metabólica de esteroles y obtener concentraciones variables y/o nuevas moléculas, se utilizaron  cepas recombinantes en donde se noquearon diferentes enzimas involucradas en la vía de esteroles. Para identificar y medir la concentración de esteroles se utilizó HPLC. La identificación de las diferentes cepas fue mediante PCR genómica. La densidad celular se determinó mediante recuento en cámara de Neubauer.Finalmente, los estudiantes aplicaron la técnica de microscopia de fluorescencia para observar el sustrato, su posible vía de ingreso y la localización de las enzimas que intervienen. Para este propósito, utilizaron Bodipy-colesterol fluorescente, marcador de fagocitosis y la utilización de cepas recombinantes en donde se fusionaron la proteína fluorescente verde a diferentes enzimas involucradas en el metabolismo de esteroles (desaturasas).